B淋巴細(xì)胞刺激因子及其受體介導(dǎo)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者B淋巴細(xì)胞活性的作用及TACI-Ig對(duì)其的影響.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)作為一種高度異質(zhì)性的自身免疫病,臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣化,病因不明,至今還沒(méi)有根治的辦法,如何避免或延緩不可逆的組織臟器的病理?yè)p害至關(guān)重要。SLE的發(fā)病機(jī)制中有多種因素參與,目前研究認(rèn)為是在不同的遺傳易感性的基礎(chǔ)上,在環(huán)境或病毒感染促發(fā)下,機(jī)體免疫系統(tǒng)功能紊亂、自身免疫耐受打破而引起多系統(tǒng)病變。
　　T、B細(xì)胞功能失控是SLE發(fā)病的重要機(jī)制,在細(xì)胞水平,C

2、D4+T細(xì)胞活性增強(qiáng),CD8+T細(xì)胞及NK細(xì)胞功能缺陷導(dǎo)致對(duì)B細(xì)胞缺乏有效的反饋抑制,TCR/CD3(T cell receptor, TCR)復(fù)合亞單位TCR-ζ鏈的缺失、FcRγ取代TCR-ζ鏈引發(fā)T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)障礙是T細(xì)胞免疫功能異常的基礎(chǔ)。近年來(lái),B細(xì)胞通過(guò)其抗體介導(dǎo)及非抗體介導(dǎo)作用在SLE發(fā)病研究中受到重視,研究顯示B細(xì)胞可以不依賴T細(xì)胞方式發(fā)生活化,在T細(xì)胞缺失的B細(xì)胞刺激因子(B lymphocyte stimulator

3、/B-cell lymphocyte-activating factor, BLyS/BAFF)轉(zhuǎn)基因小鼠中,高水平BAFF通過(guò)其受體跨膜激活劑及鈣調(diào)親環(huán)素配體相互作用分子( transmembrane activator and calcium modulator and cyclophilin ligand interactor, TACI)與Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)中的TLR7和TLR9

4、形成正性交聯(lián)作用,促進(jìn)B細(xì)胞異?；罨妥陨砜贵w生成,類似于SLE表現(xiàn)。由此,BAFF、TACI、B細(xì)胞的內(nèi)生性活化成為SLE發(fā)病中的研究熱點(diǎn)。
　　B細(xì)胞刺激因子(BAFF或BLyS)屬于腫瘤壞死因子家族,由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突樣細(xì)胞(dendritic cells, DCs)、T細(xì)胞、活化粒細(xì)胞分泌,正常情況下通過(guò)B細(xì)胞刺激因子受體3(BLyS receptor3, BR3)、TACI、B細(xì)胞成熟抗原(B cell matu

5、ration antigen, BCMA)三個(gè)受體控制著B(niǎo)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡和免疫耐受。在B細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中,BLyS與其受體結(jié)合,對(duì)于過(guò)渡期B細(xì)胞(transitional stage, TR)以及成熟B細(xì)胞至關(guān)重要。BLyS過(guò)度表達(dá)時(shí)可使過(guò)渡期(T2)自身反應(yīng)性B細(xì)胞逃逸陰性選擇,導(dǎo)致多種自身免疫現(xiàn)象。在其受體中,BR3促進(jìn)幼稚B細(xì)胞存活,但TACI的作用目前仍難以明確,一方面,TACI除了與BLyS結(jié)合外,還能與增殖誘導(dǎo)配體(a pr

6、oliferation-inducing ligand, APRIL)結(jié)合,促進(jìn)抗體生成及IgA轉(zhuǎn)換;另一方面,在TACI基因突變或缺失小鼠,TACI的負(fù)性調(diào)節(jié)作用得到體現(xiàn)。因此TACI的作用仍待深入。
　　本實(shí)驗(yàn)從臨床入手,選取初發(fā)SLE病人,探討病人外周血中B細(xì)胞亞群變化情況,并且檢測(cè)可溶性BLyS水平及BR3、TACI受體表達(dá)水平,分析上述指標(biāo)與SLE臨床活動(dòng)度關(guān)聯(lián)情況;借助于TACI融合蛋白( TACI soluble f

7、usion protein,TACI-Ig),進(jìn)一步從體外實(shí)驗(yàn)探討重組人B淋巴細(xì)胞刺激因子(recombinant human BLyS,rhBLyS)刺激下單個(gè)核淋巴細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)增殖作用及亞群、BR3、TACI受體變化。
　　目的:
　　采用SLE患者外周血,以BLyS切入點(diǎn),觀察BLyS以及BR3、TACI受體表達(dá),分析與SLE疾病活動(dòng)度的關(guān)系,進(jìn)

8、一步分析B細(xì)胞亞群,明確SLE病人體內(nèi)B細(xì)胞亞群發(fā)生變化,探討B(tài)LyS及其兩個(gè)受體通過(guò)介導(dǎo)B細(xì)胞活性在SLE發(fā)病中的作用;借助TACI-Ig對(duì)體外rhBLyS刺激SLE病人外周血PBMC作用的影響,探討TACI-Ig對(duì)SLE治療作用的機(jī)制。
　　方法:
　　選取30例初發(fā)SLE病人及20例年齡、性別相匹配的健康體檢者入選本研究。完善臨床資料,進(jìn)行SLE臨床活動(dòng)度(systemic lupus erythematosis di

9、sease activity index, SLEDAI)評(píng)分,采用SLE病人外周血,以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清可溶性BLyS水平;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)檢測(cè)B細(xì)胞表面BR3、TACI受體以及淋巴細(xì)胞表面CD分子(CD19+CD5+,CD19+CD38+,CD19+CD27+,CD4+CD25+Foxp3)表達(dá)情況變化;利用實(shí)時(shí)定量PCR( real time fluorescent quantitation PCR, qRT-

10、PCR)檢測(cè)BR3、TACI mRNA含量;MTT法檢測(cè)體外rhBLyS誘導(dǎo)PBMC增殖情況以及TACI-Ig對(duì)rhBLyS誘導(dǎo)增殖作用的影響并流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TACI-Ig作用后B細(xì)胞表面BR3、TACI受體表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1. ELISA法檢測(cè)BLyS水平,發(fā)現(xiàn)SLE病人組血清BLyS水平較正常對(duì)照組升高(P<0.05);
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)B細(xì)胞表面BR3平均熒光強(qiáng)度(mean fluorescen

11、ce index, MFI)在SLE病人組與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05),但SLE患者B細(xì)胞表面表達(dá)TACI MFI明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。RT-PCR檢測(cè)BR3 mRNA和TACI mRNA水平在SLE病人組均顯著增高(P<0.05);
　　3. CD5+, CD27+, CD38+在外周血B細(xì)胞表面表達(dá)百分比均較正常對(duì)照組明顯增高(P<0.05),SLEDAI積分與CD19+CD27+、CD19+CD38

12、+細(xì)胞百分比正相關(guān)(均P<0.01);
　　4.與正常對(duì)照相比,SLE患者組CD4+CD25+Foxp3百分比低于正常對(duì)照組(P<0.05);
　　5. SLE患者的BLyS水平與SLEDAI積分正相關(guān)(P<0.05),BLyS水平與TACI MFI呈正相關(guān)(P<0.05);
　　6. TACI MFI與SLEDAI積分正相關(guān)(P<0.01),而B(niǎo)R3表達(dá)與SLEDAI積分未呈現(xiàn)相關(guān)性。
　　7.TACI MFI

13、與淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)(P<0.01)、B細(xì)胞絕對(duì)數(shù)(P<0.05)呈負(fù)相關(guān),與抗ds-DNA滴度(P<0.01)、腎臟受累病例數(shù)(P<0.05)呈正相關(guān);
　　8.rhBLyS誘導(dǎo)PBMC增殖的亞適濃度為1μg/mL,適宜時(shí)間為24小時(shí);TACI-Ig1、10、100μg/mL可下調(diào)rhBLyS誘導(dǎo)的PBMC的增殖。SLE患者PBMC經(jīng)TACI-Ig作用后,CD19+CD38+百分比下降,BR3、TACI表達(dá)下降。
　　結(jié)論:<

14、br>　　1. SLE患者外周血BLyS水平明顯增加,與SLEDAI積分呈正相關(guān);
　　2.與BLyS水平升高相對(duì)應(yīng),SLE患者PBMC的BR3、TACI mRNA表達(dá)均明顯增加;但在B細(xì)胞表面僅TACI表達(dá)增多,BR3表達(dá)與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異;
　　3.與正常對(duì)照組相比,SLE患者外周血漿細(xì)胞、記憶性B細(xì)胞和B1B細(xì)胞比例明顯增高;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例下降;
　　4.升高的BLyS、TACI表達(dá)均與SLEDAI積分正性