B淋巴細(xì)胞刺激因子在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用及治療價(jià)值的研究.pdf

1、【目的】 通過檢測(cè)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血中B淋巴細(xì)胞刺激因子(BlyS)的表達(dá)水平，研究BlyS與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的關(guān)系，進(jìn)一步闡明系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制。通過研究B1yS-871基因位點(diǎn)的等位基因多態(tài)性為將來SLE的早期基因診斷提供理論依據(jù)，并利用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究抗BlyS單克隆抗體對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療價(jià)值。 【方法】 1．采用RT-PCR半定量技術(shù)，分別檢測(cè)38例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者及36

2、例健康者外周血細(xì)胞內(nèi)B淋巴細(xì)胞刺激因子的mRNA水平，比較差異。 2．抽取72例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和51例健康者外周血各3ml，提取DNA，采用PCR-SSP方法檢測(cè)BlyS基因-871位點(diǎn)多態(tài)性，比較系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者BlyS基因-871位點(diǎn)基因型表達(dá)傾向性。 3．抽取36例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和20例正常體檢者外周血各3ml，分成三組，一組不加刺激劑對(duì)照，剩下兩組加刺激劑后，分別不加抗BlyS單克隆抗體和加入抗BlyS

3、單克隆抗體，當(dāng)天送5％(CO<,2>，37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行血細(xì)胞體外培養(yǎng)4小時(shí)，檢測(cè)比較未刺激組，刺激后不加和加入單克隆抗體培養(yǎng)后三者血漿中的免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)和補(bǔ)體(C3、C4)的水平和BlyS，TNF-α及IL-6含量的差異。 【結(jié)果】 1．狼瘡組外周血細(xì)胞內(nèi)B淋巴細(xì)胞刺激因子的mRNA表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。 2．檢測(cè)72例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的：DN

4、A序列中B1yS-871基因位點(diǎn)，BlyS基因均為純合子，且不出現(xiàn)-871T/T基因型，僅表現(xiàn)-871C/C基因型。結(jié)果說明狼瘡患者B1yS-871基因位點(diǎn)不存在等位基因多態(tài)性，研究位點(diǎn)完全不出現(xiàn)T基因型，只出現(xiàn)C基因型。 3．細(xì)胞培養(yǎng)后，各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)在加刺激劑組均比未加刺激劑組顯著增高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。外周血細(xì)胞加刺激劑培養(yǎng)后，檢測(cè)到狼瘡組加入抗BlyS單克隆抗體培養(yǎng)的B細(xì)胞產(chǎn)生的自身抗體IgG、IgM水

5、平均比未加單抗組培養(yǎng)后的水平低，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IgA水平有下降趨勢(shì)但比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血清補(bǔ)體C3，C4水平較未加單抗組高，C3水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。狼瘡組外周血加入抗BlyS單克隆抗體培養(yǎng)后，測(cè)得培養(yǎng)后的血漿中BlyS，TNF-α及IL-6水平均較未加單抗組低，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 【結(jié)論】 1．B淋巴細(xì)胞刺激因子在狼瘡組中的表達(dá)有明顯升

6、高趨勢(shì)，說明BlyS在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的致病過程中起著重要作用。 2.在狼瘡人群中研究B1yS基因的等位基因多態(tài)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)狼瘡患者B1yS-871基因位點(diǎn)不存在多態(tài)性，研究位點(diǎn)完全不存在T基因型，只存在C基因型，并不存在位點(diǎn)多態(tài)性。 3．狼瘡組外周血在加入抗BlyS單克隆抗體培養(yǎng)后，B細(xì)胞產(chǎn)生的自身抗體水平降低，補(bǔ)體水平有所回升，同時(shí)血漿中的狼瘡相關(guān)因子BlyS，TNF-α及IL-6水平均有所降低，說明抗BlvS單克隆抗