異基因脂肪干細(xì)胞對(duì)活動(dòng)期系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者Th17淋巴細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié).pdf

1、第一章人脂肪干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定
　　 目的：原代培養(yǎng)人類脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)，并對(duì)其進(jìn)行鑒定，為下階段實(shí)驗(yàn)作準(zhǔn)備。
　　 方法：采用膠原酶消化法原代培養(yǎng)人類脂肪干細(xì)胞；倒置光學(xué)顯微鏡觀察其生長特性，同時(shí)結(jié)合表面標(biāo)記的檢測(cè)及兩個(gè)方向(成脂、成骨)的定向誘導(dǎo)，對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：原代細(xì)胞4～6 h開始貼壁，呈短梭形或小多角形，向外放射狀生長，融

2、合后呈編織狀或漩渦狀排列，流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)記示：CD13、CD44、CD49d、CD105、CD29陽性表達(dá)，而CD31、CD106陰性。體外成功進(jìn)行成脂和成骨誘導(dǎo)。
　　 結(jié)論：體外成功培養(yǎng)、鑒定人類脂肪干細(xì)胞，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，為下階段實(shí)驗(yàn)提供了實(shí)驗(yàn)材料。
　　 第二章異基因脂肪干細(xì)胞對(duì)活動(dòng)期SLE患者Th17淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)
　　 背景與目的：干細(xì)胞移植在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus er

3、ythematosus，SLE；lupus)治療中的應(yīng)用受到人們的關(guān)注，并已取得了令人振奮的效果，但機(jī)制未明。成人脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)是一種有前景的免疫治療種子細(xì)胞。Th17細(xì)胞是一種新型的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，其分泌前炎癥因子IL-17發(fā)揮強(qiáng)致炎作用，被證實(shí)參與SLE的發(fā)病。本實(shí)驗(yàn)通過體外共培養(yǎng)，觀察異基因脂肪干細(xì)胞對(duì)活動(dòng)期系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者Th17淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及功能的影響，為闡明間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的機(jī)制，也為間充

4、質(zhì)干細(xì)胞移植在免疫性疾病治療中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　 方法：招募活動(dòng)期SLE患者(SLEDAI評(píng)分≥10分)10名，抽取外周血5ml，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)，分組分別與第三代及第八代異基因脂肪干細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17淋巴細(xì)胞比例，ELISA檢測(cè)各組上清中IL-17含量。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比，兩個(gè)第三代(P3)脂肪

5、干細(xì)胞共培養(yǎng)組中Th17比例和IL-17濃度下降，而八代(P8)脂肪干細(xì)胞共培養(yǎng)組卻出現(xiàn)相反結(jié)果，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩個(gè)第三代脂肪干細(xì)胞共培養(yǎng)組間比較：直接共培養(yǎng)組中Th17比例和IL-17濃度低于Transwell共培養(yǎng)組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：低代數(shù)異基因脂肪干細(xì)胞可下調(diào)SLE患者外周血Th17細(xì)胞比例，抑制其分泌IL-17，而高代數(shù)的脂肪干細(xì)胞具相反作用。抑制作用與細(xì)胞間接觸有關(guān)。
　　 第三章異基因脂肪干

6、細(xì)胞抑制SLE患者Th17淋巴細(xì)胞機(jī)制的探討
　　 背景與目的：上一階段研究證實(shí)：低代數(shù)(第三代，P3)異基因脂肪干細(xì)胞體外能抑制活動(dòng)期SLE患者Th17淋巴細(xì)胞亞群比例及功能，具備治療SLE的潛能。作為延續(xù)，本實(shí)驗(yàn)分析、研究異基因脂肪干細(xì)胞對(duì)Th17淋巴細(xì)胞亞群抑制作用的機(jī)制。
　　 方法：對(duì)P3共培養(yǎng)組及對(duì)照組的細(xì)胞培養(yǎng)上清和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)進(jìn)行分析。ELISA檢測(cè)上清中IL-23、IL-1β含量；提取P

7、BMC中總RNA，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)FOXP3、IL-23R、IL-6R、IL-1R mRNA的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比，P3共培養(yǎng)組上清中IL-23水平降低，但I(xiàn)L-1β水平升高。P3共培養(yǎng)組IL-23R(IL-23受體)mRNA表達(dá)量降低(P＜0.05)，而FOXP3、IL-6R、IL-1R mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組間的差異沒統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：低代數(shù)(P3)ADSCs通過抑制IL-2