共刺激分子4-1BB-4-1BBL在系統(tǒng)性紅斑狼瘡T淋巴細(xì)胞激活中的作用.pdf

1、本文通過(guò)對(duì)4-1BB在SLE患者T淋巴細(xì)胞的表達(dá)的系列研究，明確4-1BB/4-1BBL通路在系統(tǒng)性紅斑狼瘡T細(xì)胞激活中的作用，進(jìn)一步探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制。 研究方法： 1、選擇系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者40例及正常對(duì)照者20例，采空腹靜脈血提取淋巴細(xì)胞，同時(shí)應(yīng)用抗CD3單抗刺激T細(xì)胞活化，懸浮于10％胎牛血清的RPMI-1640中培養(yǎng)48小時(shí)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞活化前后CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞

2、上4-1BB的表達(dá)。 2、將30例狼瘡患者及20例正常對(duì)照者靜脈血中分離的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)于10％胎牛血清的RPMI-1640中，并將其分為正常對(duì)照組、單純培養(yǎng)組、抗CD3單抗刺激活化組、抗4-1BB單抗阻斷組、地塞米松組。培養(yǎng)48小時(shí)后收集各組淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的上清液，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)各組培養(yǎng)上清液中T淋巴細(xì)胞分泌的IFN-γ和IL-4水平。并且應(yīng)用MTT法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞增殖狀態(tài)。 3、收集上述培養(yǎng)48小時(shí)的細(xì)胞，應(yīng)用R

3、T-PCR方法檢測(cè)各組淋巴細(xì)胞p38MAPKmRNA和NF-KB mRNA的表達(dá)，應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)各組淋巴細(xì)胞p-p38MAPK及NF-KB蛋白的表達(dá)。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或u檢驗(yàn)，不同指標(biāo)之間進(jìn)行相關(guān)分析。數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。 研究結(jié)果： 1、SLE患者T淋巴細(xì)胞活化前CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上4-1BB的表

4、達(dá)均明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01，P<0.01)，應(yīng)用抗CD3單抗刺激活化后CD4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上表達(dá)的4-1BB明顯增加，與活化前比較有顯著差異(P<0.01)。狼瘡患者T淋巴細(xì)胞活化前后CD4<'+>T細(xì)胞上4-1BB的表達(dá)均高于CD8<'+>T細(xì)胞上4-1BB的表達(dá)(P(0.01，P(0.01)。T淋巴細(xì)胞活化前后4-1BB<'+>CD4<'+>T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)均與免疫球蛋白(IgG)和尿微量白蛋白(MA)呈

5、顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.623，P(0.01，r=0.407，P<0.01，r=0.605，P(0.01，r=0.463，P<0.01)。 2、SLE患者應(yīng)用抗CD3單抗刺激活化后T淋巴細(xì)胞的增殖明顯高于單純培養(yǎng)組(P<0.01)，然而應(yīng)用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后T淋巴細(xì)胞增殖明顯受抑制，與活化組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，地塞米松處理組T淋巴細(xì)胞的增殖也明顯受抑制(P(0.01)。 3

6、、SLE患者T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ和IL-4的水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05，P(0.05)，而且應(yīng)用抗CD3單抗刺激活化后，T淋巴細(xì)胞分泌的IFN-γ和IL-4顯著高于單純培養(yǎng)組(P<0.01，P(0.01)，但是應(yīng)用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后T淋巴細(xì)胞分泌的IFN-γ和IL-4明顯受抑制(P(0.01，P<0.01)，尤其對(duì)IL-4水平的影響最為顯著，抑制水平達(dá)到50％以上。 4、SL

7、E患者T淋巴細(xì)胞NF-KB mRNA和p38 MAPKmRNA明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01，P<0.01)，而且SLE活化組T淋巴細(xì)胞NF-KB mRNA和p38MAPK mRNA的表達(dá)顯著高于單純培養(yǎng)組((P<0.01，P<0.01))，但是應(yīng)用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后明顯降低p3814APKmRNA的表達(dá)(P(0.01)，但是對(duì)NF-KB mRNA的表達(dá)無(wú)影響(P>0.05)。 5、SLE患者T

8、淋巴細(xì)胞NF-KB蛋白和p-p38MAPK蛋白的表達(dá)均明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01，P<0.01)，而且T淋巴細(xì)胞活化后NF-KB蛋白和p-p38MAPK蛋白的表達(dá)水平進(jìn)一步升高(P<0.01，P<0.01)。應(yīng)用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后可降低p-p38MAPK蛋白的表達(dá)(P(0.01)，但對(duì)NF-KB蛋白的表達(dá)無(wú)影響(P>0.05)。 研究結(jié)論： 1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者淋巴細(xì)胞活化前后CD

9、4<'+>T細(xì)胞和CD8<'+>T細(xì)胞上4-1BB的表達(dá)增高。 2、應(yīng)用抗4-1BB單抗阻斷4-1BB/4-1BBL通路后，T淋巴細(xì)胞的活化與增殖受到抑制，并且明顯抑制Th1/Th2細(xì)胞因子的分泌。 3、阻斷4-1BB/4-1BBL通路后可使p38MAPK的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路明顯受到抑制，但是對(duì)NF-KB轉(zhuǎn)錄因子的活化無(wú)明顯影響。 4、上述結(jié)論使我們發(fā)現(xiàn)共刺激分子4-1BB在系統(tǒng)性紅斑狼瘡T淋巴細(xì)胞活化中的重要作用，為