IFNλ1在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的表達(dá)及作用機(jī)制研究.pdf

1、背景:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Syetemic lupus erythematosus，SLE)是一種主要影響育齡期女性的自身免疫病，可以造成多種組織和器官受累，如腎臟、皮膚、肺、腦和心臟等。免疫系統(tǒng)紊亂，遺傳，激素和環(huán)境因素等都對疾病的發(fā)生發(fā)展起到一定影響。免疫復(fù)合物，自身抗體，自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞，樹突細(xì)胞等都參與了SLE的發(fā)病。非甾體抗炎藥，糖皮質(zhì)激素，免疫抑制或免疫調(diào)節(jié)劑等都能延緩SLE患者的病情進(jìn)展。
　　 干擾素λ1(IFN，

2、interferon)與IFNλ2和IFNλ3都屬于Ⅲ型干擾素，是干擾素超家族的新成員，也被命名為IL-29，IL-28A和IL-28B。外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)或樹突細(xì)胞(dendriticcells，DCs)受病毒感染或干擾素誘導(dǎo)劑多聚肌苷酸∶多聚胞苷酸poly(I∶C)或脂質(zhì)體刺激后可表達(dá)分泌IFN-λs。PCR檢測發(fā)現(xiàn)IFN-λs低水平表達(dá)于各種組織器官，

3、如血液、腦、肺、胰腺、卵巢、垂體、胎盤、前列腺和睪丸等。IFN-λ1基因表達(dá)受病毒活化的干擾素調(diào)節(jié)因子（Interferon Rregulatory Factor，IRF3）和IRF7調(diào)節(jié)，與IFN-β基因相似，IFN-λ2/3基因表達(dá)主要受IRF7調(diào)控，與IFN-α基因相似。IFN-λs家族基因結(jié)構(gòu)與IL-10密切相似，受體由兩條鏈構(gòu)成，一條是IFN-λ特異的(IFN-λRl)，另一條是IL-10R2，與IL-10，IL-22和IL-

4、26共用。IFN-λs通過與受體結(jié)合，誘導(dǎo)Jak/STAT細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，進(jìn)一步誘導(dǎo)STAT1(Signal transducer and activator of transcription 1)、STAT2、STAT3、STAT4和STAT5的磷酸化，從而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。
　　 IFN-λs具有一些與Ⅰ型干擾素相同的特征，包括抗病毒，抗增殖和抗腫瘤功能。研究發(fā)現(xiàn)，IFN-λs能以劑量和時(shí)間依賴的方式抑制HCV病

5、毒的增殖;還能通過細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的抗病毒機(jī)制，抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)HIV-1病毒的復(fù)制。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)，人類肝癌細(xì)胞內(nèi)HBV病毒的復(fù)制用高濃度的IFN-λs處理后下降了約30％。IL-28A和IL-29還能顯著抑制受人類巨細(xì)胞病毒感染后的細(xì)胞增殖。
　　 IFN-λs也具有免疫調(diào)節(jié)功能。研究發(fā)現(xiàn)，在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中，IFN-λs處理的樹突細(xì)胞能特異地誘導(dǎo)CD4(+)CD25(+)Foxp3(+)調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的增殖，這種亞群能以接觸

6、依賴的方式抑制效應(yīng)T細(xì)胞的增殖。IFN-λ1還能顯著減少IL-13mRNA和IL-13蛋白的產(chǎn)生，也能減少分泌IL-13的CD3+CD4+T細(xì)胞的數(shù)量。IFN-λ1也能特異地以劑量依賴的方式上調(diào)PBMC（主要是單核細(xì)胞）IL-6，IL-8，IL-10的分泌。IFN-λ1還能增強(qiáng)單核細(xì)胞對脂多糖LPS的應(yīng)答。IFN-λ1還能刺激人類巨噬細(xì)胞分泌IL-6，IL-8，IL-10。
　　 基于以上背景，我們比較了IFN-λ1mRNA和I

7、FN-λ1蛋白在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和正常對照的表達(dá)水平，探討了IFN-λ1蛋白和疾病活動(dòng)及常見臨床特征的相關(guān)性，研究了IFN-λ1對SLE患者PBMC分泌趨化因子IP-10，MIG和IL-8的影響。
　　 方法:用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測了SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的IFNλ1mRNA表達(dá)水平，用酶聯(lián)免疫吸附ELISA法檢測了SLE患者外周血血清的IFNλ1蛋白表達(dá)水平，比較SLE患者的IFNλ1mRNA和IFNλ1蛋白水平與

8、正常對照的差異，以及比較活動(dòng)期SLE患者和非活動(dòng)期SLE患者IFNλ1mRNA和IFNλ1蛋白的表達(dá)差異。接著探討了IFNλ1蛋白表達(dá)水平與SLE病情活動(dòng)指數(shù)(Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index，SLEDAI)，常見臨床特征，如脫發(fā)、口腔潰瘍、面部紅斑、胸膜炎、發(fā)熱、中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累、貧血、白細(xì)胞減少、血小板減少、腎臟受累，關(guān)節(jié)炎，重要實(shí)驗(yàn)室檢查，如抗ds-DNA、抗A

9、nuA、抗smith、抗rRNP、抗AHA抗體、血沉ESR、C-反應(yīng)蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4和24小時(shí)尿蛋白的相關(guān)關(guān)系。為了探討IFN-λ1參與SLE發(fā)病的可能致病機(jī)理，我們還研究了SLE患者的PBMC受不同濃度的IFN-λ1刺激后分泌趨化因子IP-10(IFN-inducible protein-10),MIG(monokine induced by IFN-γ)和IL-8的情況，探討了IFNλ1與IP-10、MIG和IL-8分泌的劑

10、量-濃度關(guān)系，同時(shí)研究了IFN-λ1對LPS誘導(dǎo)SLE患者PBMC分泌趨化因子IP-10，MIG和IL-8的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.IFN-λ1mRNA和IFN-λ1蛋白水平在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者表達(dá)水平明顯高于正常對照(p=0.012，0.000)，表明IFN-λ1可能參與SLE的發(fā)病。
　　 2.IFN-λ1mRNA和IFN-λ1蛋白水平在活動(dòng)性SLE患者(SLEDAI≥6)顯著高于非活動(dòng)性SLE患者(

11、SLEDAI＜6)(p＜0.0001，p=0.0028)，同時(shí)，活動(dòng)性SLE患者的IFN-λ1mRNA和IFN-λ1蛋白水平也明顯高于正常對照(p＜0.0001，p＜0.0001)，暗示IFN-λ1可能與SLE病情活動(dòng)相關(guān)。
　　 3.IFN-λ1蛋白水平與SLEDAI、抗ds-DNA抗體、CRP正相關(guān)(r=0.4103，p=0.007;r=0.8339，p＜0.0001;r=0.3760，p=0.0141)，與補(bǔ)體C3負(fù)相關(guān)(

12、r=-0.5863，p=0.008)。未觀察到IFN-λ1蛋白水平與抗AnuA、抗smith、抗rRNP、抗AHA抗體、血沉ESR、補(bǔ)體C4和24小時(shí)尿蛋白的相關(guān)關(guān)系。
　　 4.有腎臟受累和關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)的SLE患者的IFN-λ1蛋白表達(dá)水平高于沒有上述疾病表現(xiàn)的SLE患者和正常對照(p=0.0368，p＜0.0001;p=0.0097，p=0.0028)。沒有腎臟受累表現(xiàn)的SLE患者的IFN-λ1蛋白高于正常對照(p=0.025

13、8)。未觀察到有脫發(fā)、口腔潰瘍、面部紅斑、胸膜炎、發(fā)熱、中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累、貧血、白細(xì)胞減少、血小板減少表現(xiàn)的SLE患者表達(dá)較高的IFN-λ1蛋白。因此推測IFN-λ1可能參與SLE患者腎臟受累和關(guān)節(jié)炎的發(fā)病。
　　 5.與LPS相比，在SLE患者和正常對照，IFN-λ1誘導(dǎo)PBMC分泌較高的IP-10(p=0.039，0.028)和MIG(p=0.009，0.038)，而只在正常對照，IFN-λ1誘導(dǎo)PBMC分泌較高的IL-8(

14、p=0.049)。在SLE患者，相比正常對照，50ng/ml的IFN-λ1能誘導(dǎo)PBMC分泌較多的IP-10和MIG(p=0.02;p=0.031)。同時(shí)，在SLE患者，相比LPS，IFN-λ1誘導(dǎo)較少的IL-8分泌(p=0.016);相比陰性對照，卻能誘導(dǎo)較多的IL-8分泌(p=0.002)。因此，IFN-λ1能夠誘導(dǎo)參與SLE發(fā)病機(jī)理的趨化因子IP-10、MIG和IL-8的分泌。關(guān)于IFN-λ1與趨化因子IP-10、MIG和IL-8

15、分泌的劑量依賴關(guān)系，發(fā)現(xiàn)10ng/ml和50ng/ml的IFN-λ1能夠刺激SLE患者IP-10的分泌(p=0.033，0.005)，并誘導(dǎo)較多的IP-10分泌相比正常對照(p=0.024，0.047)。三個(gè)濃度的IFN-λ1表現(xiàn)出劑量依賴的誘導(dǎo)MIG的分泌(p=0.043，0.016，0.001)，而且高于正常對照(p=0.033，0.029，0.031)。對于IL-8的分泌，與另外兩個(gè)濃度相比，10ng/ml展示了最強(qiáng)的效應(yīng)，而且刺

16、激較多的IL-8分泌相比正常對照(p=0.008，0.018)。
　　 6.與單獨(dú)的100ng/mlLPS相比，只有50ng/ml的IFN-λ1能協(xié)助100ng/ml的LPS刺激PBMC分泌較多的IP-10(p=0.016)。三個(gè)濃度的IFN-λ1都對100ng/ml的LPS誘導(dǎo)PBMC分泌MIG起協(xié)同作用(p=0.047，0.013，0.0380)。10ng/ml和100ng/ml的IFN-λ1與100ng/ml的LPS協(xié)同誘

17、導(dǎo)較多的IL-8分泌(p＜0.001，p=0.002)。
　　 結(jié)論:這個(gè)關(guān)于IFN-λ1的初步研究論證了IFN-λ1可能參與了SLE的發(fā)病機(jī)理，而且與病情活動(dòng)相關(guān)，同時(shí)，IFN-λ1可能參與了SLE患者腎臟受累和關(guān)節(jié)炎的發(fā)病。我們還觀察到了IFN-λ1可能通過誘導(dǎo)致病的趨化因子IP-10、MIG和IL-8的分泌參與SLE的發(fā)病。目前我們對于IFN-λ1的研究工作可能為未來對于SLE發(fā)病機(jī)理的研究提供新的視角和SLE的治療提供新