循環(huán)microRNA與激素性股骨頭壞死相關性的初步研究.pdf

1、研究背景:
　　 股骨頭壞死（osteonecrosisoffemoralhead，ONFH）是常見骨關節(jié)疾病，多發(fā)生于青壯年患者，其確切病因及發(fā)病機制尚不明確。因疾病早期無特異性臨床表現(xiàn)，且缺乏簡捷有效的早期診斷手段，股骨頭壞死確診時多在病變晚期，眾多患者最終需行髖關節(jié)置換手術。而髖關節(jié)置換手術費用高昂、創(chuàng)傷較大，且假體壽命有一定局限性，對于多數(shù)患者而言，通過早期的手術及藥物干預，改變疾病進程，避免出現(xiàn)股骨頭塌陷和功能障礙，可

2、能是更好的治療選擇。而這有賴于股骨頭壞死病因的明確及早期診斷方式的進步。
　　 現(xiàn)有的研究表明，ONFH的發(fā)生可能與內皮細胞損傷、干細胞分化異常、骨細胞凋亡和機體高凝狀態(tài)等因素有關。而microRNA作為內源性的具有調控功能的非編碼RNA，參與細胞凋亡、干細胞分化、脂肪代謝等過程的調控，提示microRNA可能參與股骨頭壞死的發(fā)生發(fā)展。已有研究表明microRNA在循環(huán)中穩(wěn)定存在，且在前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等腫瘤患者以及心肌梗

3、死、糖尿病等患者血清中miRNA表達譜呈現(xiàn)特異性變化，因而循環(huán)miRNA可作為一種潛在的新型標志物，有望實現(xiàn)疾病的早期診斷。
　　 研究中我們推測股骨頭壞死患者血漿中也存在其特異表達的miRNA，這種特異表達的血漿miRNA參與股骨頭壞死的調控過程，并有可能成為一種股骨頭壞死的早期診斷標志物。利用高通量測序技術對股骨頭壞死患者進行血漿miRNA高通量測序，并通過生物信息學分析，尋找患者特異表達的血漿miRNA，有助于進一步明確股

4、骨頭壞死的發(fā)病機制，也可以為股骨頭壞死的早期診斷研究提供新的思路。
　　 研究目的:
　　 1．構建激素性股骨頭壞死患者與對照組間的血漿miRNA文庫
　　 2．應用Illumina高通量測序技術進行血漿miRNA測序
　　 3．應用生物信息學分析比較股骨頭壞死患者與對照組的血漿miRNA表達差異
　　 4．數(shù)據(jù)庫檢索差異表達的miRNA，并分析其可能的調控作用
　　 研究方法:
　

5、　 1．采集3例系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者以及性別、年齡匹配的3例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者未合并股骨頭壞死患者和3例健康志愿者的外周血血漿，使用miRNeasyMiniKit(Qiagen,217004)提取血漿RNA并構建smallRNA的文庫。
　　 2．使用Illumina公司第二代高通量測序平臺HiSeq2000測序儀，采用單向末端直接測序，進行SmallRNA的高通量測序分析，獲得各樣本miRNA數(shù)據(jù)庫。
　　

6、 3．將9個樣本分為3組，每組包含性別、年齡配比的系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者未合并股骨頭壞死患者和健康志愿者各1例。經(jīng)組內比較和組間重復后獲取股骨頭壞死特異表達的血漿miRNA。
　　 4．互聯(lián)網(wǎng)結合數(shù)據(jù)庫檢索已篩選出的候選miRNA，預測到miRNA作用的靶位點，并分析其可能的調控作用。
　　 研究結果:
　　 1．從系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者、狼瘡對照患者及健康對照者的血漿中

7、提取出足量的miRNA，并成功構建miRNA文庫。
　　 2．使用Illumina高通量測序技術成功實現(xiàn)血漿miRNA測序。
　　 3．生物信息學分析發(fā)現(xiàn)27個股骨頭壞死特異表達的血漿miRNA。其中15個miRNA表達上調，12個miRNA表達下調。
　　 結論:
　　 1．通過構建激素性股骨頭壞死患者血漿miRNA的cDNA文庫和Illumina高通量測序技術，首次進行了激素性股骨頭壞死患者血漿miR