循環(huán)microRNA與激素性股骨頭壞死相關(guān)性的初步研究.pdf

1、研究背景:
　　 股骨頭壞死（osteonecrosisoffemoralhead，ONFH）是常見骨關(guān)節(jié)疾病，多發(fā)生于青壯年患者，其確切病因及發(fā)病機制尚不明確。因疾病早期無特異性臨床表現(xiàn)，且缺乏簡捷有效的早期診斷手段，股骨頭壞死確診時多在病變晚期，眾多患者最終需行髖關(guān)節(jié)置換手術(shù)。而髖關(guān)節(jié)置換手術(shù)費用高昂、創(chuàng)傷較大，且假體壽命有一定局限性，對于多數(shù)患者而言，通過早期的手術(shù)及藥物干預(yù)，改變疾病進(jìn)程，避免出現(xiàn)股骨頭塌陷和功能障礙，可

2、能是更好的治療選擇。而這有賴于股骨頭壞死病因的明確及早期診斷方式的進(jìn)步。
　　 現(xiàn)有的研究表明，ONFH的發(fā)生可能與內(nèi)皮細(xì)胞損傷、干細(xì)胞分化異常、骨細(xì)胞凋亡和機體高凝狀態(tài)等因素有關(guān)。而microRNA作為內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA，參與細(xì)胞凋亡、干細(xì)胞分化、脂肪代謝等過程的調(diào)控，提示microRNA可能參與股骨頭壞死的發(fā)生發(fā)展。已有研究表明microRNA在循環(huán)中穩(wěn)定存在，且在前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等腫瘤患者以及心肌梗

3、死、糖尿病等患者血清中miRNA表達(dá)譜呈現(xiàn)特異性變化，因而循環(huán)miRNA可作為一種潛在的新型標(biāo)志物，有望實現(xiàn)疾病的早期診斷。
　　 研究中我們推測股骨頭壞死患者血漿中也存在其特異表達(dá)的miRNA，這種特異表達(dá)的血漿miRNA參與股骨頭壞死的調(diào)控過程，并有可能成為一種股骨頭壞死的早期診斷標(biāo)志物。利用高通量測序技術(shù)對股骨頭壞死患者進(jìn)行血漿miRNA高通量測序，并通過生物信息學(xué)分析，尋找患者特異表達(dá)的血漿miRNA，有助于進(jìn)一步明確股

4、骨頭壞死的發(fā)病機制，也可以為股骨頭壞死的早期診斷研究提供新的思路。
　　 研究目的:
　　 1．構(gòu)建激素性股骨頭壞死患者與對照組間的血漿miRNA文庫
　　 2．應(yīng)用Illumina高通量測序技術(shù)進(jìn)行血漿miRNA測序
　　 3．應(yīng)用生物信息學(xué)分析比較股骨頭壞死患者與對照組的血漿miRNA表達(dá)差異
　　 4．?dāng)?shù)據(jù)庫檢索差異表達(dá)的miRNA，并分析其可能的調(diào)控作用
　　 研究方法:
　

5、　 1．采集3例系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者以及性別、年齡匹配的3例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者未合并股骨頭壞死患者和3例健康志愿者的外周血血漿，使用miRNeasyMiniKit(Qiagen,217004)提取血漿RNA并構(gòu)建smallRNA的文庫。
　　 2．使用Illumina公司第二代高通量測序平臺HiSeq2000測序儀，采用單向末端直接測序，進(jìn)行SmallRNA的高通量測序分析，獲得各樣本miRNA數(shù)據(jù)庫。
　　

6、 3．將9個樣本分為3組，每組包含性別、年齡配比的系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者未合并股骨頭壞死患者和健康志愿者各1例。經(jīng)組內(nèi)比較和組間重復(fù)后獲取股骨頭壞死特異表達(dá)的血漿miRNA。
　　 4．互聯(lián)網(wǎng)結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索已篩選出的候選miRNA，預(yù)測到miRNA作用的靶位點，并分析其可能的調(diào)控作用。
　　 研究結(jié)果:
　　 1．從系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并股骨頭壞死患者、狼瘡對照患者及健康對照者的血漿中

7、提取出足量的miRNA，并成功構(gòu)建miRNA文庫。
　　 2．使用Illumina高通量測序技術(shù)成功實現(xiàn)血漿miRNA測序。
　　 3．生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)27個股骨頭壞死特異表達(dá)的血漿miRNA。其中15個miRNA表達(dá)上調(diào)，12個miRNA表達(dá)下調(diào)。
　　 結(jié)論:
　　 1．通過構(gòu)建激素性股骨頭壞死患者血漿miRNA的cDNA文庫和Illumina高通量測序技術(shù)，首次進(jìn)行了激素性股骨頭壞死患者血漿miR