通心絡超微粉劑對ET-1誘發(fā)兔冠狀動脈痙攣后血管NF-κB、iNOS等因子的影響.pdf

1、目的： 應用通心絡超微粉劑干預實驗動物日本大耳白兔5天后，用內(nèi)皮素-1(ET-1)靜脈注射建立冠狀動脈痙攣模型，檢測各組實驗動物冠狀動脈血管中核因子-kappaB(NF-kB)、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)等因子的表達，觀察通心絡超微粉劑對血管NF-kB、iNOS等表達的影響，探討通心絡超微粉劑緩解冠狀動脈痙攣的可能機制。 方法： 1、實驗動物分組將雄性日本大耳白兔30只隨機分為5組(每組6只)，分別為：

2、 (1)對照組(生理鹽水組，10ml/day)，(2)通心絡超微粉劑(TXL)低劑量組(150mg/kg/day)，(3)通心絡超微粉劑中劑量組(300mg/kg/day)，(4)通心絡超微粉劑高劑量組(600mg/kg/day)，(5)地爾硫卓組(10mg/kg/day)。 以上藥物均用10ml生理鹽水溶解后通過灌胃方法給藥5天，每日一次。 2、動物模型建立各組實驗動物于試驗前一天晚開始禁食18小時，可自由進水。ET

3、-1注射前30分種給予相應干預藥物灌胃。ET-1注射前15min腹腔內(nèi)注射烏拉坦(1000mg/Kg/10ml)麻醉兔后將兔俯臥固定于兔手術臺上，連接體表心電圖。試驗開始后通過兔耳緣靜脈彈丸式注射ET-1(1.4 nmol/kg)誘發(fā)冠狀動脈痙攣，連續(xù)描記標準肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，觀察心電圖T波改變。 3、血清學標本留取于ET-1注射前及注射后2h、6h分別于耳緣靜脈取血5ml，靜置待凝，3000rpm離心后，分離血清置入1.5ml

4、 EP管待用。 4、動物處死，留取組織標本ET-1注射后6h，靜脈注射肝素300IU/Kg，兩min后頸動脈放血后固定于解剖臺，開胸，斷肋，暴露心包，迅速取出心臟、分離出冠狀動脈，4℃肝素生理鹽水沖洗后，分別置于液氮中保存。 5、各項指標檢測 (1)心電圖T波高度改變：應用Medlab6.0系統(tǒng)自動測量ET-1注射前及注射后3、5、15、30min描記的心電圖標準肢體導聯(lián)T波高度，取平均值。數(shù)值以百分數(shù)形式體現(xiàn)，

5、表示T-波升高值占應用ET-1前的高度值的百分比。 (2)血清心肌壞死標志物(TnI)含量測定：取：ET-1注射前及注射后0.5h、2h、6h的血清標本，用兔血清肌鈣蛋白I檢測試劑盒(96孔板，ELLISA法)檢測血清TnI濃度。 (3)冠狀動脈NF-kB及iNOS表達檢測：用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法測定冠狀動脈血管中iNOS及NF-kB表達，測定各組目的條帶的平均灰度積分值(產(chǎn)物的面積×產(chǎn)物的平均灰度)，

6、并以β-actin作為內(nèi)參照，計算目的條帶的相對灰度積分值。 (4)冠狀動脈NF-kB活性檢測：用NF-kB活性檢測試劑盒(96孔板，ELISA法)測定各組冠狀動脈NF-kB活性，比較各組血管NF-kB活性的差異。 6、統(tǒng)計分析方法 計量資料以均數(shù)±標準差(-x±s)表示。多組計量資料均數(shù)差別的比較運用單因素方差分析，組間比較方差齊時用LSD檢驗，方差不齊時用Dunnett's T3檢驗，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗。

7、顯著性水平P值界限定為0.05。各統(tǒng)計資料均用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。 結果： 1、冠狀動脈痙攣前后T波高度改變于ET-1注射后5min最明顯。TXL中劑量組，TXL高劑量組和地爾硫卓組用藥后5min和10min與對照組相比，T波高度改變有顯著性差異(P<0.05)，TXL低劑量組的T波高度改變與對照組相比無顯著性差異(P>0.05)。TXL高劑量組在ET-1注射后5min的T波高度改變與地爾硫卓組相比有顯著性差異

8、(P<0.05)，TXL中劑量組與地爾硫卓組相比無顯著性差異(P>0.05)。 2、各組實驗動物血清TnI于ET-1注射后2小時即升高，此時僅TXL中劑量組和TXL高劑量組血清TnI與基線比無顯著性差異(P>0.05)，對照組、TXL低劑量組和地爾硫卓組血清TnI水平與基線相比均顯著升高(P<0.05)，而在ET-1注射后6小時，僅TXL高劑量組血清TnI與基線比無顯著性差異(P>0.05)。與對照組相比，ET-1注射后6小時T

9、XL中劑量組，TXL高劑量組和地爾硫卓組血清TnI差異顯著(P<0.05)，TXL低劑量組無明顯差異(P>0.05)。ET-1注射后6小時，TXL高劑量組血清TnI與地爾硫卓組相比有顯著性差異(P<0.05)。 3、冠狀動脈NF-kB RT-PCR結果顯示對照組NF-kB的表達條帶最亮，TXL低劑量組和地爾硫卓組次之，TXL中劑量組和TXL高劑量組最暗。 4、冠狀動脈iNOS RT-PCR結果顯示對照組iNOS的表達條帶

10、最亮，TXL低劑量組和地爾硫卓組次之，TXL中劑量組和TXL高劑量組最暗。 5、與對照組相比，TXL高劑量組冠狀動脈NF-kB活性有顯著性差異(P<0.05)，TXL低劑量組、TXL中劑量組和地爾硫卓組無顯著性差異(P>0.05)。 結論： 1、通過用ET-1耳緣靜脈注射能成功建立兔冠狀動脈痙攣模型。 2、通心絡超微粉劑的應用能夠降低冠狀動脈痙攣時心電圖T波的升高，降低血清心肌損傷標志物TnI的水平，從而