人胚胎早期發(fā)育及人胚胎干細(xì)胞建系的初步研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)從未經(jīng)促性腺激素刺激的多囊卵巢綜合征(PCOS)患者的卵巢皮質(zhì)層小卵泡穿刺獲得未成熟卵,并對(duì)其體外成熟、受精和早期胚胎發(fā)育進(jìn)行了初步研究.未經(jīng)刺激的未成熟卵受精后胚胎發(fā)育分別停滯于早期胚胎發(fā)育的各個(gè)時(shí)期,特別是2~8細(xì)胞期,最終只有極少部分能發(fā)育至桑葚胚和囊胚(分別為10.87％和6.52%).結(jié)果提示,取卵前是否經(jīng)過(guò)促性腺激素刺激對(duì)人未成熟卵的核成熟無(wú)顯著影響,未經(jīng)刺激的未成熟卵經(jīng)過(guò)體外成熟培養(yǎng),可以重新啟動(dòng)第一次減數(shù)分裂,完成

2、核成熟,并休止于M-Ⅱ期.但是,未經(jīng)刺激的未成熟卵成熟后的受精率和胚胎發(fā)育能力低,細(xì)胞質(zhì)的成熟問(wèn)題可能是造成這一現(xiàn)象的主要原因.另外,該研究的IVMM做為一種單一的培養(yǎng)液,不能完全模擬生理?xiàng)l件下卵母細(xì)胞發(fā)育的各個(gè)階段所處的環(huán)境.應(yīng)該根椐培養(yǎng)前卵母細(xì)胞的成熟度和其卵泡的發(fā)育狀態(tài)選用不同成分的培養(yǎng)液分階段成熟培養(yǎng),以利于卵母細(xì)胞的充分成熟.為了尋找能預(yù)示卵母細(xì)胞受精和胚胎發(fā)育能力的形態(tài)標(biāo)記,ICSI前依據(jù)第一極體和卵周隙的形態(tài)以及細(xì)胞質(zhì)有無(wú)

3、內(nèi)容物,對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行分組,比較各組間的受精率和卵裂率以及移植當(dāng)天的優(yōu)質(zhì)胚胎率.研究發(fā)現(xiàn),不同極體和卵周隙形態(tài)的卵母細(xì)胞ICSI后受精率有顯著差異(P=0.044);無(wú)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物的卵母細(xì)胞其受精后的優(yōu)質(zhì)胚胎率顯著高于有內(nèi)容物的卵母細(xì)胞(P=0.011).因此推測(cè),卵母細(xì)胞的第一極體形態(tài)和卵周隙大小反映了卵母細(xì)胞的成熟度,受精前觀察卵母細(xì)胞第一極體和卵周隙的形態(tài)可以預(yù)測(cè)ICSI后的受精能力.卵周隙正常,第一極體完整、形態(tài)不規(guī)則的卵母細(xì)胞

4、成熟度最理想,ICSI后受精率最高.而卵母細(xì)胞中有無(wú)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物與其細(xì)胞質(zhì)成熟度相關(guān),細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容物可能提示卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)不熟或過(guò)熟,對(duì)預(yù)測(cè)受精后早期胚胎發(fā)育的能力具有重要價(jià)值.我們對(duì)人囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的分離、胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)條件和傳代方法進(jìn)行了初步探討.該研究用于人ES細(xì)胞系建系的胚胎主要來(lái)源于臨床IVF或ICSI周期中的廢棄胚胎,其發(fā)育能力較差.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),胚胎質(zhì)量與原代集落的形成密切相關(guān),囊胚形成率低、質(zhì)量差,是限制建系成功的主要因素之一