小分子G蛋白R(shí)hoA、C及其效應(yīng)分子ROCK-I表達(dá)異常與卵巢癌惡性表型的關(guān)系.pdf

1、上篇:RhoA、RhoC及其效應(yīng)分子ROCK-I的表達(dá)與卵巢癌細(xì)胞惡性行為的相關(guān)性.目的:研究RhoA、RhoC及其效應(yīng)分子ROCK-I在4種卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)水平,探討它們與卵巢癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性.方法:RT-PCR檢測(cè)RhoA、RhoC及ROCK-I在卵巢癌細(xì)胞SW626、Skov-3、A2780和Caov-3中mRNA的表達(dá)水平;Western blot法檢測(cè)RhoA和ROCK-I蛋白質(zhì)的表達(dá)情況;劃痕試驗(yàn)和Boyden小室體外侵襲試

2、驗(yàn)測(cè)定4種卵巢癌細(xì)胞的體外遷移與侵襲能力.結(jié)果:RhoA、RhoC和ROCK-I在4種卵巢癌細(xì)胞中呈不同程度表達(dá),其中僅RhoC的表達(dá)水平與癌細(xì)胞侵襲力和遷移能力呈正相關(guān)(r=0.95,P<0.01).RhoA在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平不呈同步變化,且RhoA和RhoC的表達(dá)與ROCK-I的表達(dá)無相關(guān)性.4種卵巢細(xì)胞的體外侵襲和遷移能力相一致,其中SW626最強(qiáng),Caov-3最弱,Skov-3和A2780居中.結(jié)論:RhoC的表達(dá)與卵巢癌細(xì)胞

3、的體外侵襲和遷移能力相關(guān),可能作為一個(gè)獨(dú)立因素在卵巢癌的轉(zhuǎn)移過程中起作用,有望成為阻斷卵巢癌轉(zhuǎn)移的新靶點(diǎn).下篇:第一部分ROCK-I的活性的改變對(duì)卵巢癌細(xì)胞惡性表型的影響.目的:以人卵巢癌細(xì)胞SW626、Skov-3、A2780與Caov-3為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,探索ROCK-I的活性的改變對(duì)卵巢癌細(xì)胞惡性表型的影響.方法:將攜帶ROCK-I的顯性激活突變體(pCAG-myc-p160△3)的質(zhì)粒以脂質(zhì)體介導(dǎo),轉(zhuǎn)染4株人卵巢癌細(xì)胞系,采用RT-P

4、CR與Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后ROCK-ImRNA和myc-p160<'ROCK-1>△3蛋白的表達(dá),Boyden小室觀察ROCK-I ASODN對(duì)4株細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響,MTT比色法測(cè)定轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖及粘附能力的變化.結(jié)果:脂質(zhì)體介導(dǎo)的pCAG-myc-p160△3轉(zhuǎn)染后,4株細(xì)胞內(nèi)有明顯的p160<'ROCK-1>△3 mRNA的表達(dá),myc-p160<'ROCK-1>△3融合蛋白亦獲得較高的表達(dá);4株細(xì)胞的侵襲能

5、力與對(duì)照組比較分別提高31.1％、33.0％、24.5％和39.4％;隨機(jī)運(yùn)動(dòng)能力分別提高31.9％、31.5％、23.0％和38.7％;定向運(yùn)動(dòng)能力分別提高33.9％、33.0％、25.0％和40.2％.各株細(xì)胞的體外粘附能力及增殖能力未顯示出明顯的變化.結(jié)論:ROCK-I的活性與人卵巢癌細(xì)胞的體外侵襲與遷移能力密切相關(guān),ROCK-I活性的提高可顯著地增強(qiáng)卵巢癌腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力.第二部分ROCK-I反義寡核苷酸對(duì)人卵巢癌細(xì)胞惡性行為

6、的改變.目的:探索ROCK-I蛋白的表達(dá)在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用.方法:以脂質(zhì)體介導(dǎo),將ROCK-I反義寡核苷酸(ASODN)轉(zhuǎn)染人卵巢癌細(xì)胞SW626與Caov-3,采用RT-PCR與Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后ROCK-I蛋白的表達(dá),Boyden小室觀察ROCK-I ASODN對(duì)SW626與Caov-3細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響,MTT比色法測(cè)定轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞增殖及粘附能力的變化.結(jié)果:脂質(zhì)體介導(dǎo)的ROCK-I ASODN轉(zhuǎn)染后,兩

7、株細(xì)胞內(nèi)ROCK-I mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)明顯減少,最大抑制率可達(dá)49％;細(xì)胞的侵襲能力受到明顯的抑制.10μmol/L組和20μmol/L組SW626細(xì)胞的侵襲能力分別為對(duì)照組的75.6％和54.7％,Caov-3為68.8％和50.0％;轉(zhuǎn)染兩種濃度ASODN的SW626與Caov-3細(xì)胞的隨機(jī)運(yùn)動(dòng)能力分別為對(duì)照組的80.0％、63.7％、72.0％和55.9％;定向運(yùn)動(dòng)能力分別為對(duì)照組的83.9％、64.1％、72.5％和54.