小分子G蛋白RhoA、C及其效應分子ROCK-I表達異常與卵巢癌惡性表型的關系.pdf

1、上篇:RhoA、RhoC及其效應分子ROCK-I的表達與卵巢癌細胞惡性行為的相關性.目的:研究RhoA、RhoC及其效應分子ROCK-I在4種卵巢癌細胞中的表達水平,探討它們與卵巢癌轉移的相關性.方法:RT-PCR檢測RhoA、RhoC及ROCK-I在卵巢癌細胞SW626、Skov-3、A2780和Caov-3中mRNA的表達水平;Western blot法檢測RhoA和ROCK-I蛋白質的表達情況;劃痕試驗和Boyden小室體外侵襲試

2、驗測定4種卵巢癌細胞的體外遷移與侵襲能力.結果:RhoA、RhoC和ROCK-I在4種卵巢癌細胞中呈不同程度表達,其中僅RhoC的表達水平與癌細胞侵襲力和遷移能力呈正相關(r=0.95,P<0.01).RhoA在轉錄水平和蛋白水平不呈同步變化,且RhoA和RhoC的表達與ROCK-I的表達無相關性.4種卵巢細胞的體外侵襲和遷移能力相一致,其中SW626最強,Caov-3最弱,Skov-3和A2780居中.結論:RhoC的表達與卵巢癌細胞

3、的體外侵襲和遷移能力相關,可能作為一個獨立因素在卵巢癌的轉移過程中起作用,有望成為阻斷卵巢癌轉移的新靶點.下篇:第一部分ROCK-I的活性的改變對卵巢癌細胞惡性表型的影響.目的:以人卵巢癌細胞SW626、Skov-3、A2780與Caov-3為實驗對象,探索ROCK-I的活性的改變對卵巢癌細胞惡性表型的影響.方法:將攜帶ROCK-I的顯性激活突變體(pCAG-myc-p160△3)的質粒以脂質體介導,轉染4株人卵巢癌細胞系,采用RT-P

4、CR與Western blot檢測轉染后ROCK-ImRNA和myc-p160<'ROCK-1>△3蛋白的表達,Boyden小室觀察ROCK-I ASODN對4株細胞侵襲及遷移能力的影響,MTT比色法測定轉染前后細胞增殖及粘附能力的變化.結果:脂質體介導的pCAG-myc-p160△3轉染后,4株細胞內有明顯的p160<'ROCK-1>△3 mRNA的表達,myc-p160<'ROCK-1>△3融合蛋白亦獲得較高的表達;4株細胞的侵襲能

5、力與對照組比較分別提高31.1％、33.0％、24.5％和39.4％;隨機運動能力分別提高31.9％、31.5％、23.0％和38.7％;定向運動能力分別提高33.9％、33.0％、25.0％和40.2％.各株細胞的體外粘附能力及增殖能力未顯示出明顯的變化.結論:ROCK-I的活性與人卵巢癌細胞的體外侵襲與遷移能力密切相關,ROCK-I活性的提高可顯著地增強卵巢癌腫瘤細胞的轉移能力.第二部分ROCK-I反義寡核苷酸對人卵巢癌細胞惡性行為

6、的改變.目的:探索ROCK-I蛋白的表達在卵巢癌轉移中的作用.方法:以脂質體介導,將ROCK-I反義寡核苷酸(ASODN)轉染人卵巢癌細胞SW626與Caov-3,采用RT-PCR與Western blot檢測轉染前后ROCK-I蛋白的表達,Boyden小室觀察ROCK-I ASODN對SW626與Caov-3細胞侵襲及遷移能力的影響,MTT比色法測定轉染前后細胞增殖及粘附能力的變化.結果:脂質體介導的ROCK-I ASODN轉染后,兩

7、株細胞內ROCK-I mRNA和蛋白質的表達明顯減少,最大抑制率可達49％;細胞的侵襲能力受到明顯的抑制.10μmol/L組和20μmol/L組SW626細胞的侵襲能力分別為對照組的75.6％和54.7％,Caov-3為68.8％和50.0％;轉染兩種濃度ASODN的SW626與Caov-3細胞的隨機運動能力分別為對照組的80.0％、63.7％、72.0％和55.9％;定向運動能力分別為對照組的83.9％、64.1％、72.5％和54.