整合素α-,V-β-,3-與柯薩奇B組病毒感染以及柯薩奇B組病毒誘導(dǎo)凋亡的研究.pdf

1、整合素是一類重要的細(xì)胞表面受體,也是許多病毒感染宿主細(xì)胞的受體.為了研究整合素αvβ3在CVB感染細(xì)胞過程中的作用,以及CVB與整合素結(jié)合過程中RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列的作用,我們用不同濃度的抗整合素αvβ3單克隆抗體以及含有RGD序列的合成多肽封閉HeLa細(xì)胞表面的相應(yīng)位點(diǎn),再用CVB1-CVB6感染細(xì)胞,培養(yǎng)24h后,通過對(duì)細(xì)胞病變情況的觀察發(fā)現(xiàn),用180μg/ml和360μg/ml的抗體封閉后,分別有50％和75％的

2、細(xì)胞病變被抑制;用20μg/ml和40μg/ml的RGD封閉后,分別有50％和75％的細(xì)胞病變被抑制.因此我們認(rèn)為,CVB感染細(xì)胞的過程中,整合素αvβ3是病毒感染和入侵的重要受體,但可能不是唯一的受體,尚存在其它有助于病毒入侵細(xì)胞的機(jī)制;同樣,整合素α<,v>β<,3>與病毒的結(jié)合利用了RGD序列,但可能還存在其他途徑.細(xì)胞凋亡是一種由基因控制的細(xì)胞自主性死亡方式,凋亡的細(xì)胞表現(xiàn)出特有的形態(tài)學(xué)改變.已知腸道病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡存在兩種類

3、型:caspase依賴型和caspase非依賴型.為了證實(shí)柯薩奇B組病毒感染后是否會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞凋亡的類型,我們將CVB1-CVB6感染HeLa細(xì)胞,通過觀察感染后3h、45h、50h、69h、74h的細(xì)胞形態(tài)以及將上述各時(shí)段的細(xì)胞裂解后進(jìn)行western blot分析.我們發(fā)現(xiàn),細(xì)胞在感染后3h形態(tài)正常,感染后45h及以后各時(shí)段均表現(xiàn)出明顯的形態(tài)學(xué)變化,同時(shí)感染后細(xì)胞各時(shí)段的western blot在32KD處均出現(xiàn)一條強(qiáng)的c