紅景天多糖體外抗柯薩奇B-,3-病毒實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的本課題通過建立的體外病毒性心肌炎(VMC)細(xì)胞模型，應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)探討紅景天多糖(RSA)的體外抗柯薩奇B3病毒(CVB3)作用和對心肌細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制，探究其作用環(huán)節(jié)(藥物靶點(diǎn))，為RSA的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。方法在VERO細(xì)胞中加入不同稀釋度紅景天多糖后，感染CVB3病毒觀察細(xì)胞病變，MTT染色比較各組間活細(xì)胞數(shù)的變化，分析紅景天多糖對病毒感染后的VERO細(xì)胞是否有保護(hù)作用；采用差速貼壁法培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞，鏡下觀察心

2、肌細(xì)胞搏動次數(shù)，使用α-actin免疫組化法鑒定培養(yǎng)心肌細(xì)胞的純度；以CVB3病毒感染心肌細(xì)胞建立病毒性心肌炎細(xì)胞模型，于感染病毒1小時(shí)后加入不同濃度的紅景天多糖，逐日觀察心肌細(xì)胞搏動次數(shù)、細(xì)胞病變(CPE)，MTT染色以比較各組間存活細(xì)胞數(shù)的差別；病毒繁殖抑制實(shí)驗(yàn)比較不同分組間半數(shù)組織感染量(TCID50)的差別以驗(yàn)證紅景天多糖在VERO細(xì)胞及心肌細(xì)胞上的抗病毒活性；紫外分光光度法測定原代乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液中心肌酶LDH、CK-M

3、B的活性變化。采用流式細(xì)胞術(shù)和對凋亡相關(guān)基因表達(dá)影響的RT-PCR檢測比較各組間細(xì)胞凋亡的差別。結(jié)果紅景天多糖在VERO細(xì)胞和原代乳鼠心肌細(xì)胞試驗(yàn)中可有效抑制柯薩奇B3病毒引起的細(xì)胞病變(P＜0.05，P＜0.01)；對病毒的繁殖有抑制作用(對數(shù)值升高一個(gè)以上數(shù)量級)，降低心肌酶(LDH、CK-MB)的釋放，對細(xì)胞凋亡有抑制作用(P＜0.01)。結(jié)論紅景天多糖對柯薩奇B3病毒感染的VERO細(xì)胞和原代乳鼠心肌細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。對柯薩