益心康對(duì)感染柯薩奇病毒B3的體外心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Fas-FasL的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)建立體外感染柯薩奇病毒(CVB3)大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的模型，探討益心康對(duì)體外感染CVB3的大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，初步分析其對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Fas/Fasl的影響，為中藥復(fù)方益心康的進(jìn)一步臨床應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.原代心肌細(xì)胞培養(yǎng):取出生1-3天的SD大鼠乳鼠，消毒，開(kāi)胸，取心，清洗，取心尖部心室肌，剪碎。用胰蛋白酶消化，收集上清離心，加培養(yǎng)基將沉淀吹打均勻，差速貼壁

2、1小時(shí)，去除成纖維細(xì)胞，將未貼壁的細(xì)胞懸液放置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，隔日換液。每日于倒置熒光顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞。
　　 2.常規(guī)Hela細(xì)胞培養(yǎng)。
　　 3.病毒擴(kuò)增并測(cè)CVB3病毒半數(shù)組織感染量(TCID50)
　　 4.提取益心康藥液。
　　 5.測(cè)益心康藥液提取液及利巴韋林注射液作用于心肌細(xì)胞時(shí)的最大無(wú)毒劑量(TCID0)。
　　 6.實(shí)驗(yàn)分組及藥物干預(yù):取已貼壁生長(zhǎng)長(zhǎng)勢(shì)良好的心肌細(xì)胞，分成四組:

3、正常細(xì)胞對(duì)照組，病毒對(duì)照組，益心康治療組，利巴韋林治療組。分別于培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)時(shí)在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞病變(CPE)，若病毒對(duì)照組CPE出現(xiàn)100％（++++）時(shí)，立刻停止培養(yǎng)。
　　 7.指標(biāo)的檢測(cè):
　　 (1)倒置熒光顯微鏡下觀察24小時(shí)及48小時(shí)心肌細(xì)胞各組形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞病變(CPE)。
　　 (2)用RT-PCR方法檢測(cè)各組心肌組織中Fas、FasLmRNA的表達(dá)
　　 8.統(tǒng)計(jì)分

4、析
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1、益心康組的細(xì)胞病變輕于利巴韋林組。
　　 2、益心康組細(xì)胞給藥48小時(shí)后的Fas、FasLmRNA的表達(dá)較病毒組降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05）。益心康組及利巴韋林組減輕Fas、FasLmRNA的表達(dá)效果無(wú)明顯差異(p＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、益心康可以減輕細(xì)胞病變，對(duì)心肌細(xì)胞有保護(hù)作用。
　　 2、益心康可有效減輕細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Fas、F