四環(huán)素類阻抗型免疫電化學(xué)檢測(cè)方法的研究.pdf

1、四環(huán)素類(Tetracyclines,TCs)抗生素是由鏈霉菌產(chǎn)生的一類廣譜抗生素，常用于各種動(dòng)物傳染性疾病的治療以及動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑。動(dòng)物性食品中TC濫用及超標(biāo)殘留給人類健康帶來了嚴(yán)重威脅，因此，迫切需要研究能對(duì)其進(jìn)行快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。本課題合成了TC完全抗原，制備了TC特異性抗體，以此為基礎(chǔ)，建立了快速、準(zhǔn)確、靈敏的TC殘留阻抗型免疫電化學(xué)傳感檢測(cè)方法。 合成了TC完全免疫原和包被原。對(duì)TC苯環(huán)上4位和7位碳原子衍生化后，通

2、過重氮化法分別合成了TC免疫原和包被原。同時(shí)對(duì)載體蛋白BSA進(jìn)行了羧基化，減少BSA自身的偶聯(lián)，提高所合成抗原的純度及偶聯(lián)比。經(jīng)過HPLC-MASS、凝膠色譜、紅外圖譜、紫外圖譜鑒定，免疫原和包被原均合成成功，且由羧基化的BSA制備的免疫原(TC-aBSA)比未經(jīng)羧基化的BSA制備的免疫原(TC-BSA)偶聯(lián)比高，分別為11:1和7:1，包被原的偶聯(lián)比為5:1。 制備了TC特異性抗體并通過間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法對(duì)抗體進(jìn)行了表征。

3、用制備的TC免疫原TC-BSA和TC-aBSA各免疫兩只新西蘭大白兔，其中三只產(chǎn)生了針對(duì)TC的抗血清，經(jīng)硫酸銨法初步純化后，效價(jià)分別為14.4萬、25.6萬、32萬左右。取效價(jià)為32萬的抗血清建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，測(cè)得OD450值與TC標(biāo)準(zhǔn)品濃度在40～120ng/kg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性回歸方程為：Y=-0.0064X+1.1308，R2=0.9937，TC的半數(shù)抑制率IC50為97μg/kg，與土霉素(OTC)、金霉素(CTC

4、)的交叉反應(yīng)率分別為100％和85％。 建立了基于阻抗技術(shù)和納米材料的電化學(xué)免疫傳感檢測(cè)方法。以制備的TC抗體為識(shí)別元件，通過L-半胱氨酸(L-Cys)和納米金(Nano-Au)自組裝技術(shù)設(shè)計(jì)傳感器界面固定抗體，通過電化學(xué)交流阻抗技術(shù)，建立了快速、準(zhǔn)確、靈敏的TC免疫電化學(xué)傳感檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)得出工作電極修飾的最佳條件如下：L-Cys自組裝濃度為0.5％，pH值為4.5，時(shí)間為2h；自組裝Nano-Au粒徑為20nm，pH6.0；