姜黃素血漿樣品的高通量液相色譜定量分析及其藥代動力學(xué)研究.pdf

1、藥物代謝動力學(xué)是定量描述藥物進(jìn)入體內(nèi)以后的吸收、分布、代謝、排泄過程，通過測定生物樣本中的藥物或者代謝產(chǎn)物的濃度，可以更好的闡明藥物的藥效或者毒性，為新藥研究的代謝篩選和臨床用藥的安全有效提供重要依據(jù)。隨著組合化學(xué)技術(shù)和天然藥物分離制備技術(shù)的發(fā)展，大量的候選藥物需要進(jìn)行藥代動力學(xué)評價，這就要求建立并優(yōu)化相關(guān)分析方法對生物樣品中的目標(biāo)成分（藥物、代謝產(chǎn)物、其他外源性成分）進(jìn)行高靈敏度、快速準(zhǔn)確、低消耗的定量分析。本文構(gòu)建了“準(zhǔn)確、靈敏、低

2、耗、高通量”的分析策略，建立了基于常規(guī)液相柱的快速有效分離分析方法，將其應(yīng)用到姜黃素的藥代動力學(xué)研究中。全文由四章組成：
　　 第一章概述，主要論述了生物樣品的快速高通量分析方法在藥代動力學(xué)中的重要性和應(yīng)用進(jìn)展，姜黃素的研究現(xiàn)狀以及其體內(nèi)外含量測定所用的常規(guī)檢測方法，在此基礎(chǔ)上本文闡述了實驗立題依據(jù)和研究內(nèi)容。
　　 第二章LC/MS/MS方法，為了研究軟膠囊中姜黃素在SD大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特點，選擇姜黃素提取物軟膠囊

3、內(nèi)容物口服給藥，姜黃素提取物注射液靜脈注射給藥兩種方式，考察軟膠囊中姜黃素在SD大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)，計算口服給藥軟膠囊內(nèi)容物的絕對生物利用度。采用LC/MS/MS方法，血漿預(yù)處理采用甲醇沉淀蛋白（4:1，V/V）。色譜分離條件為：Ultimate）（B C-185μ50×4.6mm ID，柱溫25℃；流動相：甲醇：水（80:20），其中含有甲酸0.01％，采用等梯度洗脫方式，流速0.30ml/min，進(jìn)樣量20μ L，分析時間6

4、min。質(zhì)譜檢測條件為：采用ESI離子源、負(fù)離子檢測，選擇SRMI作方式進(jìn)行一/二級質(zhì)譜分析；其中姜黃素Q1（Mass）367、Q3（MaSS）149，Collision energy21.5eV；內(nèi)標(biāo)白藜蘆醇Q1（Mass）227、Q3（Mass）143，Collision energy16eV；Collision
　　 gas1.8 mTorr檢測器電壓1500V。
　　 第三章LC-UV方法，以姜黃素為研究對象，通

5、過對液相柱的選擇和優(yōu)化，建立了常規(guī)高效液相色譜-紫外檢測分析方法，用于姜黃素脂質(zhì)體的質(zhì)量控制和絕對生物利用度研究。分別對內(nèi)標(biāo)，流動相組成，流動相pH值，提取溶劑，液相色譜柱等影響因素做了系統(tǒng)的研究。最終使用Dikma色譜分析柱（5μm，100×4.6mm），流動相為乙腈：5％乙酸（75:25，v/v），流速為1mL/min，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為50μL，紫外檢測波長為420nm，內(nèi)標(biāo)為大黃素，用96孔板蛋白沉淀進(jìn)行血漿樣品前處理，每個

6、樣品的分析周期為3min，最定量限為1ng/mL，常規(guī)條件下即可實現(xiàn)生物樣品的高通量分析。
　　 第四章HPLC-FLD方法，基于上述方法的特點與不足，在樣品前處理方法改進(jìn)的基礎(chǔ)上，建立了HPLC-FLD法用于姜黃素生物樣品的快速分離分析。通過對實驗條件的優(yōu)化，最終選擇Dikma色譜分析柱（5μm，100×4.6mm）進(jìn)行分析，流動相為乙腈：3％乙酸（80:20，V/V），流速為1mL/min，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為50μL，λ