應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測定大鼠血漿中Thailandepsin B及其藥代動力學(xué)研究.pdf

1、背景：Thailandepsin B（TDP-B）TDP-B是一種具有抗腫瘤作用的組蛋白脫乙?；敢种苿?。腫瘤細胞中組蛋白脫乙?；府惓１磉_，從而導(dǎo)致組蛋白大部分呈低乙?；癄顟B(tài)。組蛋白去乙?；敢种苿┩ㄟ^調(diào)整腫瘤細胞中組蛋白異常的乙酰化狀態(tài)，使組蛋白乙?；皆龈?，誘導(dǎo)特定基因表達增加，從而導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡，達到抗腫瘤作用效果。
　　目的：闡明TDP-B在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征，為TDP-B的成藥性評價及其進一步的開發(fā)提供科學(xué)依

2、據(jù)。
　　方法：首先，開發(fā)和驗證基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）的測定大鼠血漿中TDP-B含量的生物分析方法。然后，對三組大鼠分別經(jīng)尾靜脈給予3.00mg/kg、9.00mg/kg、27.0mg/kg劑量的TDP-B并采集給藥后不同時間點的血樣。通過測定大鼠血漿樣品中的TDP-B濃度，獲得TDP-B的藥代動力學(xué)參數(shù)，并考察藥代動力學(xué)的暴露值（曲線下面積）與劑量之間的線性關(guān)系。樣品的LC-MS/MS分析方法優(yōu)化主要體現(xiàn)在樣品預(yù)處

3、理和制備方法、色譜分離條件和質(zhì)譜檢測參數(shù)等方面的優(yōu)化。通過在全血和血漿樣品加入酸和酯酶抑制劑的樣品預(yù)處理方法解決了TDP-B在生物基質(zhì)中不穩(wěn)定問題。樣品制備主要是通過采用乙酸乙酯溶劑對血漿樣品進行液液萃取的方式完成。色譜分析采用梯度洗脫程序完成，其流動相A由0.1％甲酸+5mM甲酸銨組成,流動相B由甲醇/乙腈(8/2,V/V)組成，流速為0.800mL/min；色譜柱為Phenomenex Gemini C18柱（50 mm×2.0mm

4、,5μm）。質(zhì)譜檢測采用電噴霧離子源（ESI）并在正離子模式下采用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式對分析物進行定量分析。定量分析時，分析物TDP-B和內(nèi)標非索非那定所選用的MRM離子對分別為m/z530.3→277.2和m/z502.5→466.2。根據(jù)美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）對生物樣品分析方法驗證法規(guī)的要求，本研究對方法的特異性、靈敏度、線性范圍、精密度與準確度、基質(zhì)效應(yīng)、回收率及穩(wěn)定性等參數(shù)進行了相關(guān)考察。在完成生物分析方法完整驗證

5、后，對所有藥代動力學(xué)研究中的大鼠血漿樣品中的TDP-B進行定量分析，并應(yīng)用Winnolin軟件計算獲得 TDP-B的藥代動力學(xué)參數(shù)。此外，本研究還對血漿樣品中檢測到的一個代謝產(chǎn)物（M）的結(jié)構(gòu)進行了初步鑒定。
　　結(jié)果及結(jié)論：其一、在樣品預(yù)處理過程中，通過在全血和血漿中加入0.25％甲酸、0.625％鹽酸和2.5mM Dichlorvos混合穩(wěn)定劑，TDP-B在大鼠血漿及全血當中的穩(wěn)定性問題得到解決。其二、本研究成功建立了基于LC-

6、MS/MS測定大鼠血漿中TDP-B濃度的分析方法。本方法的線性范圍為1.00-1000ng/mL，具有較高的靈敏度（LLOQ為1.00ng/mL）和較短的分析時間（3.7min/每個樣品），具有較好的批內(nèi)、批間精密度（RSD≤10.9％）和較好的準確度（RE％為-6.7％-15％）。其三、大鼠藥代動力學(xué)研究結(jié)果表明，TDP-B在3.00mg/kg-27.0mg/kg的劑量范圍內(nèi)的藥時曲線下面積與劑量呈正比，符合線性動力學(xué)特征。其四、初步

7、推測大鼠真實樣品中的一個代謝產(chǎn)物（M）為TDP-B在體內(nèi)還原成TDP-B*后再發(fā)生氧化反應(yīng)生成的一相代謝產(chǎn)物。
　　意義：首先，本研究開發(fā)的增加TDP-B在大鼠全血和血漿樣品中穩(wěn)定性的樣品預(yù)處理方法為確保TDP-B的準確測定及后續(xù)的藥代動力學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)，也為其他在生物基質(zhì)樣品中不穩(wěn)定藥物的樣品預(yù)處理方法提供了借鑒。其次，本研究首次建立了快速、靈敏、可靠的測定大鼠血漿中TDP-B的生物分析方法，進而獲得TDP-B在大鼠體內(nèi)的藥代