谷跗線螨的形態(tài)學觀察、抗原定位及精氨酸激酶基因的克隆與序列分析.pdf

1、由變應原引起的變態(tài)反應性疾病(如哮喘、變應性鼻炎等)是當前世界性的重大衛(wèi)生學問題，總發(fā)病率高達10％～30％，并有逐年增多的趨勢。谷跗線螨作為一種常見的倉儲螨類，以往人們對其關注較少，其形態(tài)特征、組織結構特點和生物學特性尚不十分明了。
　　為進一步明了谷跗線螨的基本生物學尤其是其顯微形態(tài)特點，探討其與粉塵螨抗原的交叉反應性，并嘗試探討其致敏原的相關分子，本研究進行了以下三方面的工作：
　?。?）谷跗線螨的掃描電鏡觀察及其內部

2、主要器官的觀察：從空調濾網灰塵中采集谷跗線螨，在體視顯微鏡下清洗處理活螨后，用SEM觀察其外部形態(tài)特征。經形態(tài)鑒定確認為該螨種后，以Bouin液固定，制作谷跗線螨石蠟切片， HE染色后光鏡觀察其內部形態(tài)結構。結果清晰地觀察到谷跗線螨的體表形態(tài)以及主要的內部器官的構造，明確了谷跗線螨顎體、背板、基節(jié)板、表皮內突、背足體、剛毛等外部形態(tài)以及其消化道等的內部結構特點。
　?。?）谷跗線螨與粉塵螨交叉反應性變應原的定位研究：制作谷跗線螨石

3、蠟切片，先用對粉塵螨過敏患者的陽性血清作為一抗孵育，再用生物素標記的羊抗人 IgE抗體作為二抗，免疫組織化學染色后在光學顯微鏡下分析其交叉反應性抗原存在位置。研究發(fā)現谷跗線螨口咽部、中腸、腸內容物、腸壁及生殖腺等均有陽性反應。研究表明谷跗線螨體內存在可誘發(fā)人體 IgE抗體的變應原，主要分布于螨消化道、腺體及體壁等部位。
　　（3）谷跗線螨精氨酸激酶（arginine kinase,AK）基因的克隆及序列分析：從空調濾網灰塵中采集谷

4、跗線螨（約3000只）提取總 RNA，經逆轉錄 RT－PCR擴增谷跗線螨AK基因后測序?？寺～@得的谷跗線螨AK基因由724個堿基組成，其編碼的蛋白相對分子質量約為26019，等電點為10.10。成功克隆了谷跗線螨AK基因，為進行谷跗線螨AK蛋白的重組表達以及過敏原性分析奠定基礎。
　　上述研究積累了有關谷跗線螨顯微形態(tài)、與已知過敏原的交叉反應性和過敏原相關分子研究的新資料，為今后谷跗線螨過敏性疾病的特異性診斷、治療和預防奠定工作基