黑尾葉蟬轉(zhuǎn)錄組分析以及精氨酸激酶和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的克隆.pdf

1、黑尾葉蟬(Nephotettixcincticeps)屬于半翅目，葉蟬科。它是一種主要分布在長(zhǎng)江中上游和西南各省的水稻害蟲，同時(shí)能夠傳播水稻黃矮病，水稻紋枯病等水稻病害，這些病害一旦暴發(fā)將對(duì)水稻產(chǎn)量造成極大的危害。本研究中，我們以利用RNAi技術(shù)培育抗蟲水稻為目標(biāo)，對(duì)黑尾葉蟬的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了高通量測(cè)序和生物信息學(xué)研究，其結(jié)果如下。
　　 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析轉(zhuǎn)錄組一共得到27，777，050個(gè)reads，利用轉(zhuǎn)錄組專用拼接軟件Trini

2、ty拼接得到unigene81，225條，平均長(zhǎng)度445bp。其中36，668條序列經(jīng)比對(duì)找到同源基因(E＜0.00001)，另有9655條序列利用軟件ESTScan預(yù)測(cè)到了CDS。
　　 在轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中我們發(fā)現(xiàn)了預(yù)測(cè)為絲氨酸蛋白酶、α-淀粉酶等的消化相關(guān)蛋白;PRGP、GNP在內(nèi)的免疫相關(guān)蛋白;RNAi途徑必須蛋白和一些看家基因的unigene，這些unigene都可以作為潛在的抗蟲靶標(biāo)基因。
　　 為初步了解相關(guān)基因

3、在黑尾葉蟬消化系統(tǒng)中的作用，我們利用real-timePCR檢測(cè)了其在中腸和馬氏管的表達(dá)情況。
　　 相關(guān)基因克隆和發(fā)育特征研究我們克隆得到了黑尾葉蟬精氨酸激酶(NcAK，Nc是黑尾葉蟬的拉丁文名縮寫)和一個(gè)delta類型的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因(NcGST，Nc是黑尾葉蟬的拉丁文名縮寫)的CDS序列，并對(duì)兩個(gè)基因進(jìn)行了序列分析和表達(dá)特性檢測(cè)。結(jié)果表明，NcAK的CDS包含的開放閱讀框?yàn)?068bp，編碼一個(gè)的356aa的蛋白