復(fù)方苦參對(duì)內(nèi)毒素致兔急性呼吸窘迫綜合征保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)是威脅人類健康的嚴(yán)重危重癥之一,其發(fā)病機(jī)理至今尚未闡明,病死率極高,為臨床亟待解決的一個(gè)主要課題。本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌內(nèi)毒素(其主要致病成分為脂多糖LPS)復(fù)制兔ARDS模型,通過觀察模型動(dòng)物病理生理及病理變化,探討內(nèi)毒素(ET)致傷機(jī)理及復(fù)方苦參的保護(hù)性作用,旨在為臨床提供理論參考。
　　方法:
　　隨機(jī)將21只新西蘭白兔分為3組:對(duì)照組(A組)、致傷組(B組)和治療組(C組),

2、每組7只。實(shí)驗(yàn)前12h禁食、禁水,25％烏拉坦(4ml/kg)腹腔麻醉,分離左側(cè)頸動(dòng)脈,檢測(cè)生命體征和采集血液標(biāo)本,建立耳緣靜脈通道用于給藥。A組靜脈注射生理鹽水(4ml/kg),B、C兩組經(jīng)靜脈一次性注射LPS720ug/kg體重復(fù)制兔的ARDS模型,C組同時(shí)靜脈注射復(fù)方苦參注射液(4ml/kg)進(jìn)行干預(yù)治療。具體檢測(cè)指標(biāo)如下:
　　1.0h、0.5h、1h、2h、4h點(diǎn)記錄血壓、呼吸等生命體征;
　　2.0h、0.5h、

3、1h、2h、4h點(diǎn)測(cè)量動(dòng)脈血?dú)?
　　3.測(cè)定肺組織濕干重比;
　　4.光鏡下觀察各組動(dòng)物肺組織病理學(xué)改變;
　　5.免疫組化方法測(cè)定各組動(dòng)物肺組織髓樣細(xì)胞觸發(fā)性受體1(TREM-1)、髓過氧化物酶(MPO)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、細(xì)胞間粘附因子-1(ICAM-1)、水通道蛋白-1(AQP-1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.A組在實(shí)驗(yàn)過程中各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)相對(duì)平穩(wěn),三組間

4、在實(shí)驗(yàn)前各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.生命體征測(cè)定:
　　(1)呼吸:靜注LPS后,B組動(dòng)物出現(xiàn)呼吸急促,最快頻率約78次/分,0.5h變化最為顯著,之后呼吸頻率逐漸下降;C組亦出現(xiàn)先快后慢的變化趨勢(shì)。
　　(2)血壓:A組動(dòng)物在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中血壓維持在93mHg以上;B組在給LPS后0.5h,血壓明顯下降,明顯低于A組(P<0.01);C組實(shí)驗(yàn)后血壓亦呈下降趨勢(shì),其各時(shí)點(diǎn)顯著低于A組但明顯高于B組。
　　(3

5、)血?dú)夥治?A組動(dòng)物血?dú)夥治鲋稻谡７秶?靜注LPS后,B組兔血PaO2及Pa02/Fi02顯著降低,0.5h為最低點(diǎn),分別為55.23mmHg和258.7mmHg,符合ARDS診斷標(biāo)準(zhǔn),之后隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸恢復(fù)。C組兔Pa02/Fi02值在0.5h點(diǎn)雖然有所下降,與A組比較有差異(P<0.05),但未達(dá)到ARDS診斷標(biāo)準(zhǔn),仍部分高于B組(P<0.01)。PaCO2在B組和C組均有下降。
　　3.實(shí)驗(yàn)4h后,B組肺組織濕/干比顯

6、著高于A組(P<0.01),C組明顯高于A組(P<0.01)但低于B組(P<0.05);
　　4.肺組織光鏡下病理學(xué)檢查:A組肺泡結(jié)構(gòu)基本正常,肺泡腔內(nèi)無(wú)明顯出血、滲出等;B組可見肺泡間隔增厚、充血、肺水腫表現(xiàn),肺泡腔變小,其內(nèi)可見紅染物質(zhì)滲出及散在蔟集的中性粒細(xì)胞粘壁、扣押,可見小灶性肺不張;C組肺泡間隔輕度增厚,肺泡腔較B組增大,炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少,肺泡淤血水腫減輕,肺損傷輕于內(nèi)毒素組。
　　5.免疫組化方法測(cè)定TREM-1

7、表達(dá)結(jié)果:A組中未見明顯TREM-1表達(dá);B組肺泡間隔、中性粒細(xì)胞可見大量深棕色顆粒;C組肺泡間隔、中性粒細(xì)胞可見深棕色顆粒較致傷組明顯減少。
　　6.免疫組化方法測(cè)定MPO表達(dá)結(jié)果:A組肺組織中MPO幾乎無(wú)表達(dá);B組致傷組的陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物為棕黃色,多分布在肺泡壁、肺泡間隔及中性粒細(xì)胞的細(xì)胞膜中,C組中棕黃色產(chǎn)物減少。
　　7.免疫組化方法測(cè)定TNF-α表達(dá)結(jié)果:A組肺泡腔內(nèi)可見少許淡黃色片狀或顆粒狀產(chǎn)物輕度表達(dá);致傷組陽(yáng)性產(chǎn)

8、物呈棕黃色或深棕色,多分布在肺組織的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。C組陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物較B組減輕。
　　8.免疫組化方法測(cè)定ICAM-1表達(dá)的結(jié)果:A組正常肺組織中無(wú)明顯ICAM-1表達(dá);B組致傷組ICAM-1明顯表達(dá),肺泡間隔、血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中均可見大量深棕色顆粒;C組可見數(shù)量不等的棕黃色顆粒,但數(shù)量較致傷組明顯減少。
　　9.免疫組化方法測(cè)定AQP-1表達(dá)結(jié)果:A組肺組織中無(wú)AQP-1表達(dá);B組陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色,主要在肺

9、泡間隔及肺泡上皮細(xì)胞的胞漿中表達(dá),C組肺泡腔中可見少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn),棕黃色表達(dá)產(chǎn)物減少,AQP-1表達(dá)減弱。
　　10.免疫組化方法測(cè)定VEGF表達(dá)結(jié)果:A組肺組織中的VEGF水平處于低表達(dá)狀態(tài);而B組肺組織中表達(dá)明顯,表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色,多分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞的胞膜或胞漿中;C組肺泡間隔增厚減輕,棕黃色表達(dá)產(chǎn)物減少,VEGF表達(dá)減弱。
　　結(jié)果判定:不著色為陰性,淡黃色為弱陽(yáng)性(+),深棕色為強(qiáng)陽(yáng)性(+++),中

10、度陽(yáng)性介于弱陽(yáng)性與強(qiáng)陽(yáng)性之間(++)。
　　結(jié)論:
　　1.一次性靜脈注射LPS(720ug/kg)可以建立兔ARDS動(dòng)物模型。
　　2. ARDS時(shí)炎癥反應(yīng)失控,促炎反應(yīng)和抗炎反應(yīng)平衡失調(diào)。
　　3.內(nèi)毒素致傷組肺組織出現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、微循環(huán)障礙等一系列病理生理變化。
　　4.免疫組化方法測(cè)定TREM-1、MPO、TNF-α、ICAM-1、AQP-1、VEGF各項(xiàng)指標(biāo)在LPS致傷組均有明顯表