石榴皮水提物對(duì)應(yīng)激致大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)異常的抑制作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、據(jù)《本草綱目》記載，石榴皮主治瀉痢，下血，脫肛，崩中帶下。石榴皮能收斂澀腸，水煎劑治療久瀉、久痢滑脫不禁有效，已載入中國(guó)藥典。前人的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，石榴皮提取物對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎、胃潰瘍的發(fā)生都有一定的抑制作用。隨著社會(huì)競(jìng)爭(zhēng)、生存壓力的增大，因應(yīng)激導(dǎo)致的胃腸功能紊亂性疾病----腸易激綜合征(IBS)的患病率達(dá)到8-16％。IBS的共同特征是胃腸運(yùn)動(dòng)功能改變和內(nèi)臟器官的敏感性異常。那么，石榴皮水提物對(duì)應(yīng)激致胃腸運(yùn)動(dòng)異常有無(wú)影響?這種影響是通過(guò)

2、何種途徑發(fā)揮作用的?這是本文所要研究的問(wèn)題。
　　大鼠束縛-浸水應(yīng)激(RWIS)，作為一種心理和軀體的復(fù)合應(yīng)激模型，已被廣泛應(yīng)用于研究應(yīng)激性胃粘膜損傷的發(fā)生機(jī)制及其臨床治療藥物的篩選。本文通過(guò)探索石榴皮水提物對(duì)正常大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)有無(wú)影響及作用途徑、石榴皮水提物對(duì)束縛-浸水應(yīng)激大鼠胃腸壁內(nèi)肌間神經(jīng)叢活動(dòng)影響的初步研究，為石榴皮藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)和利用提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本文的實(shí)驗(yàn)研究分為以下三個(gè)部分:
　　一、石榴皮水提物

3、對(duì)正常大鼠離體胃腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響利用張力換能器和BL-420生物機(jī)能系統(tǒng)記錄胃腸運(yùn)動(dòng)曲線，分別用0.1、0.5、1、5mg/ml4種濃度的石榴皮水提物、不同藥物及1mg/ml石榴皮水提物和不同藥物混合液作用于離體胃、小腸和結(jié)腸段，分析給藥前5min，后5、10min離體胃、小腸和結(jié)腸段收縮頻率和幅度。與給藥前比較，1和5mg/ml2種濃度的石榴皮水提物對(duì)十二指腸段的收縮頻率均有明顯的抑制作用(P＜0.05)；0.1、0.5 mg/ml

4、雖然也使頻率降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；除5mg/ml組在給藥后第10min的收縮幅度小于給藥前(P＜0.05)外，其他各組對(duì)收縮幅度的影響均不顯著(P＞0.05)。各種濃度的石榴皮水提物對(duì)胃、結(jié)腸的作用與十二指腸類(lèi)似。1mg/ml的鞣酸、沒(méi)食子酸分別作用于胃、小腸和結(jié)腸段，均可引收縮頻率和幅度下降(P＜0.05)。5μg/ml的組織胺、氯雷他定對(duì)離體胃運(yùn)動(dòng)曲線的頻率、幅度影響，與給藥前比較，差異不顯著(P＞0.05)；這兩種

5、藥物分別與1mg/ml石榴皮水提物混合后，作用于離體胃時(shí)，胃的收縮頻率、幅度均顯著性的下降(P≤0.01)；對(duì)大小腸也存在類(lèi)似的作用。結(jié)果提示:石榴皮水提物的1、5mg/ml2種濃度為引起胃腸平滑肌收縮的有效濃度；起效成分可能是石榴皮水提物中的鞣酸和沒(méi)食子酸；其作用可能通過(guò)調(diào)節(jié)組織胺活動(dòng)途徑實(shí)現(xiàn)的。
　　二、石榴皮水提物對(duì)大鼠在體胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響動(dòng)物隨機(jī)分為雙蒸水組、石榴皮水提物組、嗎丁啉組和阿托品組，每組6只。灌胃給藥，每天一

6、次，連續(xù)5天。末次灌藥1h后，再灌胃2ml營(yíng)養(yǎng)性半固體糊，40min后頸椎脫臼處死大鼠。以胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率和排便的粒數(shù)為指標(biāo)，檢測(cè)不同藥物對(duì)大鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與蒸餾水組、阿托品組相比，石榴皮組胃內(nèi)殘留率顯著性降低(P＜0.05)；小腸推進(jìn)率顯著性升高(P＜0.05)；與嗎丁啉組相比，胃內(nèi)殘留率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；石榴皮組大鼠排便量分別與蒸餾水組、嗎丁啉組組比較，差異均顯著(P＜0.05)；石榴皮與阿托品組

7、比較，差異不顯著(P＞0.05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:石榴皮水提物能夠促進(jìn)正常大鼠胃排空和小腸對(duì)食糜的推進(jìn)作用，該作用與嗎丁啉類(lèi)似。但對(duì)大鼠排便量有抑制作用，且該抑制作用與阿托品的類(lèi)似。
　　三、石榴皮對(duì)束縛-浸水應(yīng)激大鼠胃腸壁肌間神經(jīng)叢內(nèi)神經(jīng)元活動(dòng)的影響利用Fos蛋白免疫標(biāo)記法、Fos蛋白與膽堿乙?；该庖唠p標(biāo)方法，研究石榴皮水提物對(duì)束縛-浸水應(yīng)激大鼠胃腸壁內(nèi)肌間神經(jīng)叢內(nèi)神經(jīng)元活動(dòng)的影響。動(dòng)物隨機(jī)分為雙蒸水+未應(yīng)激組、雙蒸水+應(yīng)激組

8、、石榴皮水提物+應(yīng)激組，每組3只。灌胃給藥，每天一次，連續(xù)5天。末次灌藥1h后，行束縛-浸水應(yīng)激1h，烏拉坦注射過(guò)量處死大鼠，取胃腸，進(jìn)行免疫組化處理。末次灌藥1h后，行束縛-浸水應(yīng)激3h，同上法處死大鼠，取胃測(cè)定胃黏膜損傷指數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組相比，石榴皮水提物應(yīng)激組肌間神經(jīng)叢的Fos蛋白表達(dá)在胃、小腸和結(jié)腸中均降低，但胃壁中不顯著(P＞0.05)，小腸和結(jié)腸中降低明顯(P＜0.05)。束縛-浸水應(yīng)激中這些 Fos蛋白表達(dá)陽(yáng)性的神經(jīng)