CD40信號和IL-2R-IL-2對單核細胞來源DC體外分化發(fā)育和功能的作用及機制.pdf

1、樹突狀細胞(DC)是體內(nèi)己知功能最強的專職性抗原提呈細胞(APC)，能刺激初始型T淋巴細胞活化，從而啟動機體特異性免疫應答。DC在誘導特異性抗腫瘤免疫應答中發(fā)揮重要的作用，DC疫苗業(yè)已用于某些腫瘤的臨床免疫治療。IL-2是最早被發(fā)現(xiàn)的淋巴細胞因子之一，不僅在T淋巴細胞的克隆性增殖和活化過程中發(fā)揮關鍵作用，而且可以促進NK細胞和B淋巴細胞的增殖分化。重組IL-2已被臨床作為治療性藥物應用。近年來，小鼠DC分泌IL-2的生物學效應已有研究，

2、但IL-2在人外周血單核細胞來源DC(Mo-DC)分化成熟和功能介導中的作用尚未見報導。 本文分析CD40信號和TNF-ot對體外誘導Mo-DC表達CD25(IL-2Ra)的調(diào)節(jié)作用，繼而著重研究CD40信號激發(fā)的Mo-DC能否表達功能性高親合力IL-2受體(IL-2R)，在此基礎上觀察外源性IL-2對Mo-DC分化發(fā)育和功能的影響，以此探討IL-2／IL-2R在調(diào)節(jié)Mo-DC分化、發(fā)育和成熟過程中介導的作用，為Mo-DC疫苗的

3、研制及其在免疫治療中的應用提供新的思路。 第一部分CD40信號對單核細胞來源DC表達IL-2R／IL．2的誘導作用及其相關生物學效應 目的：比較抗人CD40激發(fā)型單抗和TNF-(z對Mo-DC體外誘導表達CD25(IL-2Rot)的作用，以及Mo-DC表面高親合力IL-2R的表達，并進一步探討外源性IL-2在Mo-DC分化成熟和功能介導中的生物學效應。 方法：采用聯(lián)合GM-CSF和IL-4體外誘導Mo-DC的培養(yǎng)

4、方法，分別加入CD40單抗和TNF-a誘導Mo-DC成熟；免疫熒光標記分析Mo-DC表型；Westemblotting檢測Mo-DCNF-r．B核轉(zhuǎn)位；共聚焦熒光顯微鏡和免疫共沉淀檢測高親和力IL-2受體的表達；細胞免疫組化檢測IL-2的分泌；ELISA法和胞漿細胞因子測定IFN-~的分泌水平；3H-TdR摻入法分析Mo-DC對自體T細胞的促增殖效應。 結果：(1)CD40信號能有效的誘導成熟Mo-DC上調(diào)表達CD25(IL-2

5、Rot)，而TNF一α則無此作用。在CD40單抗激發(fā)24h后的Mo-DC細胞核內(nèi)能檢測到NF-r,B的亞基，而TNF-tt激發(fā)24h后的Mo-DC細胞核內(nèi)未能檢測到NF-r．B亞基的核轉(zhuǎn)位；(2)CD40單抗激發(fā)成熟的Mo-DC表達高親和力的IL-2受體，同時能夠誘導Mo-DC分泌IL-2： (3)外源性IL-2可進一步促進CD40激發(fā)的Mo-DC分泌IFN-y，同時3H-TdR摻入法的結果也顯示，在Mo-DC培養(yǎng)時加入外源性I

6、L-2可以增強Mo-DC對T細胞的促增殖作用。 結論：CD40單抗激發(fā)的Mo-DC上調(diào)表達CD25(IL-2Rct)并介導Mo-DC在早期的NF-r．B的核轉(zhuǎn)位，表達功能性高親和力IL-2受體；外源性IL-2能促進Mo-DC分泌IFN-7和增強Mo-DC對T細胞的促增殖效應，IL-2及其受體在Mo-DC活化和功能介導中有重要意義。 第二部分CD40信號對Mo-I)C共表達CD83和CD25的誘導作用及機制 目的：

7、研究IL-2對人外周血單核細胞來源的樹突狀細胞CD83表達的調(diào)節(jié)作用，探討CD40信號誘導的CD83和IL-2受體在Mo-DC生物學行為中的作用。 方法：采用聯(lián)合GM-CSF和IL-4體外誘導Mo-DC的培養(yǎng)方法，加入CD40單抗誘導Mo-DC成熟；免疫熒光標記檢測外源性IL-2對共刺激分子表達的調(diào)節(jié)作用；共聚焦熒光顯微鏡檢測CD83和IL-2受體的分布。 結果：CD40信號激發(fā)的Mo-DC表達CD83和IL-2受體，兩

8、者在細胞膜上共定位；與單獨CD40單抗激發(fā)組相比，外源性IL-2可以上調(diào)共刺激分子CD25和CD83的表達；在37~C時，DC表面的高親和力IL-2受體與外源性IL-2相互作用，引起IL-2受體的內(nèi)化，同時CD83分子也內(nèi)化至細胞漿內(nèi)，出現(xiàn)了CD25和CD83分子共內(nèi)吞現(xiàn)象，而在4~C時則沒有發(fā)生該現(xiàn)象。 結論：首先證實CD83和CD25分子在CD40信號激發(fā)的Mo-DC表面能夠相互作用，與Mo-DC的分化成熟相關并介導相應的生