HSPA1A和HSPA8在分娩中的功能研究.pdf

1、參與分娩啟動的機制和因素有很多，包括細胞凋亡、免疫炎癥調控因子和激素。然而，具體的作用機制尚不清楚。HSP70蛋白是熱休克蛋白家族中最重要的成員之一，有多種生物學功能。有報道稱HSP70直接或間接參與細胞凋亡，免疫炎癥反應和激素刺激響應。
　　為了探索HSP70參與分娩啟動的分子機制，我們通過轉染HSP70家族兩個代表性基因(HSPA1A和HSPA8)的人重組質粒和其si-RNA于人羊膜上皮細胞(WISH細胞)，過表達和敲低兩個基

2、因。然后通過Western blot和RT-PCR分析，檢測幾個通路的標志基因表達變化(細胞凋亡:BAX、 BCL2和FAS;免疫炎癥反應:TLR4、TAP1和IL-8;雌激素刺激響應:ESR2)。結果表明在WISH細胞中，HSPA1A和HSPA8的過表達下調BAX、 FAS、BAG2和 ESR2，上調BCL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8; HSPA1A和HSPA8表達的敲低上調BAX、 FAS、BAG2和 ESR2，下調B

3、CL2、TLR4、TAP1、CHIP和IL-8。初步表明了HSPA1A和HSPA8有抗細胞凋亡的性質，并且參與免疫炎癥反應以及雌激素信號通路。也即HSPA1A和HSPA8可能通過細胞凋亡、免疫炎癥反應和雌激素刺激響應參與分娩。另外，定量和Western blot的結果表明，基因表達水平變化最劇烈的是IL-8和ESR2。然后，通過使用ERK1/2磷酸化特異性抑制劑--PD98，059，處理WISH細胞，以及通過ELISA分析雌二醇(E2)

4、的變化情況。結果表明，HSPA1A和HSPA8可以通過抑制ERK1/2的磷酸化調控ESR2的表達，進而影響雌激素刺激的響應。
　　最后，通過對妊娠15天的孕鼠腹腔注射LPS，構建早產鼠模型。用HSPA1A的特異性抑制劑--PFT-μ處理LPS誘導的早產鼠模型，取小鼠胎膜進行免疫組化。結果表明，當僅用PFT-μ處理孕鼠時，IL-8的表達下降而ESR2的表達上升;當用PFT-μ處理LPS誘導的早產鼠模型時，IL-8的表達上升而ESR2

5、的表達下降。也即，HSPA1A的抑制可通過減少IL-8的表達和增加ESR2的表達抑制早產的發(fā)生。且以上所有體內試驗的結果和體外細胞試驗的結果一致，這進一步證明了HSPA1A和HSPA8在分娩中的作用。
　　總之，HSPA1A和HSPA8可以通過刺激免疫炎癥反應和促進雌激素的刺激響應來誘導分娩啟動。也即，在分娩期間，HSPA1A和HSPA8超表達時，HSPA1A和HSPA8可以通過刺激免疫炎癥反應，促進雌激素的刺激響應，誘導分娩。H