BMP6基因在雞股骨、脛骨生長板的表達以及其對軟骨細(xì)胞增殖分化調(diào)控的探究.pdf

1、雞的體重和其生產(chǎn)性能的高低取決于骨骼發(fā)育程度，脛長的變化與整個骨架發(fā)育呈強正相關(guān)，而且，隨著肉雞的快速生長，腿部疾病也日益增加。研究表明，家禽長骨的生長發(fā)育及成熟都是由一系列因子相互作用實現(xiàn)的。BMP6作為BMPs家族成員之一，可通過Smad信號通路在骨骼發(fā)育中起調(diào)控作用，但長骨的發(fā)生發(fā)育是否與BMP6存在相關(guān)？BMP6在調(diào)控骨骼發(fā)育過程中是否還有其他信號通路的參與？迄今尚不清楚。因此，本試驗針對上述的兩個問題進行探究。
　　本試

2、驗采用體型上有較大差異的艾維茵與矮腳黃雞為研究對象，首先利用realtime-PCR技術(shù)檢測BMP6基因在雞不同生長時間點的股骨生長板和脛骨生長板兩個組織中的表達情況，探究BMP6與長骨發(fā)育的關(guān)系;其次比較兩個品種軟骨細(xì)胞的增殖能力及BMP6在不同品種軟骨細(xì)胞中的表達情況，從而探討兩個品種軟骨細(xì)胞是否存在差異，為后續(xù)試驗提供參考;最后我們以軟骨細(xì)胞為模型，進行不同濃度生長激素的誘導(dǎo)，檢測生長激素誘導(dǎo)過程中BMP6的表達量變化，并結(jié)合si

3、RNA干擾技術(shù)，檢測干擾BMP6后，軟骨細(xì)胞增殖分化相關(guān)信號通路中關(guān)鍵基因的表達情況，探究了BMP6在軟骨生長過程中的主要作用機制。結(jié)果表明:
　　(1)艾維茵與矮腳黃兩個品種的雞在胚胎期與初生時個體上并沒有顯著差異。且在40日齡時，艾維茵公、母雞各性狀（雞重、腿重、股骨重、脛骨重、股骨長、脛骨長、股骨直徑、脛骨直徑）顯著高于矮腳黃公、母雞;70日齡時，艾維茵公雞除脛骨長/脛骨直徑兩個性狀外，其他性狀顯著高于矮腳黃公雞，艾維茵母雞

4、各性狀顯著高于矮腳黃母雞。
　　(2)BMP6在艾維茵和矮腳黃兩個品種不同時間點的股骨生長板和脛骨生長板中的表達差異不顯著，說明BMP6對雞股骨和脛骨的分化發(fā)育成熟不具有決定性作用，但卻參與了軟骨生長板的分化過程。
　　(3) BMP6在艾維茵與矮腳黃軟骨細(xì)胞培養(yǎng)第四天時的表達量均顯著增加，與兩品種軟骨細(xì)胞增殖曲線相吻合，但兩者軟骨細(xì)胞增殖能力和BMP6在兩品種軟骨細(xì)胞的表達量差異均不顯著，這表明BMP6在軟骨細(xì)胞增殖分化時

5、高表達。
　　(4)軟骨細(xì)胞對50ng/ul生長激素的誘導(dǎo)最敏感，且在48h時增殖明顯，BMP6的表達也顯著(P＜0.05)升高，表明軟骨細(xì)胞增殖時，BMP6高表達。干擾BMP6后，與對照組相比，48h、72h兩個時間點處理組中的ColⅡ、ColⅩ表達量都顯著(P＜0.05)降低，表明軟骨細(xì)胞的增殖分化都受到了抑制。因此，我們認(rèn)為BMP6參與了軟骨細(xì)胞增殖分化過程。
　　(5) siRNA干擾BMP6表達時，軟骨細(xì)胞增殖分化

6、受阻，IGF1R、JAK2、PKC、PTH和PTHrP在48h時處理組細(xì)胞中的表達量與對照組差異不顯著，而在72h處理組細(xì)胞中的表達量顯著低于對照組(P＜0.05);且Ihh在48h、72h兩個時間點處理組中的表達與對照組相比都顯著(P＜0.05)降低。上述結(jié)果說明IGF1R、JAK2、PKC、PTH、Ihh、PTHrP這幾個基因參與了BMP6對軟骨細(xì)胞的增殖分化調(diào)控。
　　綜上所述，BMP6主要通過調(diào)控軟骨細(xì)胞增殖分化參與雞骨骼