2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩55頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、布魯菌病(Brucellosis)作為一種在世界范圍內(nèi)危害嚴(yán)重的人畜共患病,具有重要的獸醫(yī)公共衛(wèi)生意義。為建立一種牛布魯菌病快速可靠的血清學(xué)檢測(cè)方法,本論文在對(duì)其三種外膜蛋白原核表達(dá)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了基于重組蛋白混合抗原的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)研究,具體如下:
  根據(jù)GenBank中登錄的編碼牛布魯菌外膜蛋白OMP19、OMP22、OMP28的基因序列,以布

2、魯菌A544株基因?yàn)槟0澹謩e設(shè)計(jì)了3對(duì)特異性引物,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段。將目的基因分別克隆到pCold-TF原核表達(dá)載體系統(tǒng)中,經(jīng)PCR鑒定、酶切鑒定和測(cè)序鑒定正確后進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)、重組蛋白的SDS-PAGE分析與Western blot鑒定,并利用親和層析技術(shù)對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化,結(jié)果成功擴(kuò)增出534 bp、639 bp和753 bp的編碼牛布魯菌外膜蛋白OMP19、OMP22、OMP28的基因序列,并克隆到

3、pCold-TF原核表達(dá)載體構(gòu)建了3種蛋白基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pCold-TF-OMP19、pCold-TF-OMP22和pCold-TF-OMP28。誘導(dǎo)表達(dá)的3種重組蛋白分別為69 kD、74 kD和80 kD,均為可溶性蛋白,Western blot顯示均有良好反應(yīng)原性。利用親和層析技術(shù)對(duì)三種重組蛋白進(jìn)行純化,獲得了高純度的蛋白。
  將三種重組蛋白按濃度比,等比例混合作為包被抗原,經(jīng)過(guò)優(yōu)化包被條件、封閉條件、反應(yīng)溫度和時(shí)間等

4、初步建立了牛布魯菌感染抗體檢測(cè)的間接酶聯(lián)免疫吸附方法(indirect ELISA,iELISA),并進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室保存的300份臨床樣品檢測(cè)應(yīng)用,同時(shí)進(jìn)行虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)(RBPT)、同類進(jìn)口商品化試劑(IDEXX)的平行檢測(cè)。結(jié)果顯示建立的iELISA方法,最佳的混合抗原濃度為(1∶1∶1)μg/ml,最適封閉液為10%馬血清,最適一抗稀釋度為1∶200,二抗稀釋度為1∶20000。該方法特異性良好,不與小腸結(jié)腸炎耶爾森菌診斷血清和大

5、腸桿菌診斷血清發(fā)生交叉反應(yīng)。300份臨床血清樣品檢測(cè)結(jié)果顯示虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)檢測(cè)62份為陽(yáng)性,238份為陰性;以RBPT檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),IDEXX試劑盒檢測(cè)62份陽(yáng)性血清中60份為陽(yáng)性(假陰性2份),敏感率為96.78%(60/62);238份陰性血清中236份為陰性(假陽(yáng)性2份),特異率為99.16%(236/238),總符合率為98.67%(296/300)?;旌峡乖璻OMPs-ELISA法檢測(cè)結(jié)果為,62份陽(yáng)性血清中5

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論