FSH、GnRH在大鼠海馬的表達(dá)及其對(duì)缺血再灌注損傷的保護(hù)性研究.pdf

1、促性腺激素釋放激素（GnRH）是由下丘腦神經(jīng)元分泌的十肽小分子，促性腺激素釋放激素受體（gonadotropin-releasinghormonereceptor,GnRHR）屬于七次跨膜的G蛋白耦聯(lián)受體超家族。GnRH與GnRHR結(jié)合后，調(diào)節(jié)促性腺激素細(xì)胞分泌黃體生成素(luteininghormone,LH)和卵泡刺激素(follicle-stimulatinghormone,FSH)，在生殖過程中發(fā)揮重要作。促性腺激素包括FSH和

2、LH，他們都是由α，β亞單位構(gòu)成的二聚體糖蛋白。FSHR和LHR都是具有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)的G蛋白耦聯(lián)受體。FSH和LH的分泌都受到下丘腦分泌的GnRH的調(diào)控。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，GnRH及其受體還存在于下丘腦-垂體-性腺軸以外的腦組織、消化道、頜下腺、胰腺等消化器官以及前列腺癌等腫瘤細(xì)胞中，其功能也超出了生殖范疇。作為雌激素上游激素的GnRH及其受體在海馬內(nèi)也廣泛存在，但未見有對(duì)其在缺血損傷下表達(dá)變化的報(bào)道。除垂體外，多種組織內(nèi)均有FSH的存

3、在。生殖系統(tǒng)中FSH可存在于前列腺，乳腺，睪丸，以及胎盤。在非生殖系統(tǒng)內(nèi)可存在于胃的壁細(xì)胞，其功能也超出了生殖調(diào)控的范疇。FSHR除了在性腺中表達(dá)之外，也表達(dá)于輸卵管上皮和子宮頸等部位。近年的研究發(fā)現(xiàn)，大鼠海馬神經(jīng)元中存在許多激素及其受體，其中包括作為生殖激素的GnRH、LH及它們的受體，但未見有存在FSH及其受體的報(bào)道。腦缺血再灌注損傷可以引發(fā)選擇性的、延遲的神經(jīng)元死亡，這種死亡主要是通過神經(jīng)元的凋亡所引起的。近年來的研究已經(jīng)表明，雌

4、激素對(duì)海馬CA1區(qū)缺血引起的神經(jīng)元損傷和神經(jīng)元凋亡具有保護(hù)作用，并且這種保護(hù)性作用是通過海馬內(nèi)的雌激素受體實(shí)現(xiàn)。GnRH及FSH是雌激素的上游激素，關(guān)于GnRH及FSH對(duì)海馬神經(jīng)元缺血再灌注損傷的保護(hù)性研究未見報(bào)道。
　　由此我們進(jìn)行了以下研究：應(yīng)用原位雜交及免疫組織化學(xué)方法，結(jié)合圖像分析系統(tǒng)，觀察了缺血再灌注損傷后大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元GnRH及其受體的表達(dá)變化；應(yīng)用原位雜交方法觀察了FSH在大鼠海馬的表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)

5、雙標(biāo)記方法，在激光共聚焦顯微鏡下進(jìn)行了大鼠海馬FSH及其受體的共定位研究；應(yīng)用免疫組織化學(xué)鄰片雙標(biāo)記方法進(jìn)行了大鼠海馬FSH與GnRHR的共定位研究；通過制作大鼠MCAO模型、進(jìn)行TUNEL染色的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及制作大鼠海馬神經(jīng)元OGD模型、進(jìn)行流式細(xì)胞儀AnnexinV/PI雙染色法檢測(cè)的體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了FSH、GnRH對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元缺血再灌注損傷的保護(hù)性研究。
　　通過實(shí)驗(yàn)得到主要研究結(jié)果如下：大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元GnRH及GnR

6、HmRNA的表達(dá)量隨缺血再灌注損傷時(shí)間的延長而減少，陽性細(xì)胞數(shù)也隨損傷時(shí)間延長而迅速減少。GnRHR及GnRHRmRNA的表達(dá)量隨缺血再灌注損傷時(shí)間的延長先增加后減少，陽性細(xì)胞數(shù)隨損傷時(shí)間延長而減少。損傷后3d,CA1區(qū)多型層及輻射層出現(xiàn)較多GnRH、GnRHR免疫反應(yīng)及GnRH、GnRHRmRNA雜交信號(hào)弱陽性細(xì)胞；海馬CA1至CA4區(qū)及齒狀回的神經(jīng)元呈FSH免疫反應(yīng)陽性，同時(shí)也顯示FSHmRNA陽性雜交信號(hào)，海馬CA1至CA4區(qū)及齒

7、狀回的神經(jīng)元呈FSHR免疫反應(yīng)陽性，F(xiàn)SH和FSHR共定位于海馬的同一神經(jīng)元，F(xiàn)SH和GnRHR共定位于同一海馬神經(jīng)元；缺血再灌注損傷后72h，F(xiàn)SH干預(yù)組和GnRH干預(yù)組CA1區(qū)TUNEL染色陽性神經(jīng)元平均灰度值大于對(duì)照組，即FSH干預(yù)組和GnRH干預(yù)組TUNEL染色陽性產(chǎn)物少于對(duì)照組。缺血再灌注損傷后72h，F(xiàn)SH干預(yù)組和GnRH干預(yù)組CA1區(qū)TUNEL染色陽性神經(jīng)元數(shù)量比對(duì)照組少；FSH干預(yù)組、GnRH干預(yù)組與對(duì)照組相比，凋亡神經(jīng)

8、元百分比增加，存活神經(jīng)元百分比減少。FSH干預(yù)組、GnRH干預(yù)組與無干預(yù)組相比，凋亡細(xì)胞百分比減少，存活細(xì)胞百分比增加。
　　綜上所述，本研究結(jié)果表明：缺血再灌注損傷后，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元GnRH及GnRHR的表達(dá)發(fā)生變化，GnRH可能參與CA1區(qū)腦組織損傷后修復(fù)過程的調(diào)節(jié)；海馬能表達(dá)FSH，海馬的FSH神經(jīng)元也是FSH作用的靶細(xì)胞。海馬神經(jīng)元產(chǎn)生的FSH可能通過旁分泌和自分泌途徑對(duì)海馬的功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，海馬產(chǎn)生的GnRH也可能