外源性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1對(duì)肝星狀細(xì)胞中Smad3和Smad7早期表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討外源性TGF-β1對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞系(HSC-T6)信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的影響,為抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：(1)HSC-T6培養(yǎng)基中加/不加外源性TGF-β1(10ng/ml),誘導(dǎo)2h后應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)TGF-β/Smad信號(hào)通路中各組蛋白mRNA的表達(dá);(2)選用同樣的方法檢測(cè)加入外源性TGF-β1后不同時(shí)間點(diǎn)Smad7mRNA的表達(dá);(3)將陰性對(duì)照質(zhì)粒(ctrl)、Smad3小

2、干擾質(zhì)粒(siRNA-Smad3)分別轉(zhuǎn)染HSC-T6,各組再根據(jù)加/不加外源性TGF-β1分為(+)組和(-)組,RT-PCR法檢測(cè)Smad3、Smad7mRNA的表達(dá);(4)Western印跡法分析外源性TGF-β1對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)Smad3、Smad7蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：(1)外源性TGF-β1能誘導(dǎo)TGF-β/Smad信號(hào)通路中Smad7mRNA的高表達(dá)(2.990±0.101,t=-33.962,P=0.001),但

3、對(duì)TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3、Smad4、Smad6mRNA的表達(dá)均無(wú)明顯影響(均P>0.05);(2)外源性TGF-β1處理HSC-T6后,Smad7mRNA的表達(dá)迅速增高,于2h達(dá)峰值,為0h的2.99倍,隨后開(kāi)始逐漸下降,Smad7的表達(dá)量與0h相比均無(wú)明顯變化(均P>0.05);(3)與陰性對(duì)照組相比,siRNA-Smad3組Smad3mRNA的表達(dá)明顯下降(0.532±0.169,t=4.810,P=0.041

4、),同時(shí)siRNA-Smad3(-)組Smad7mRNA的表達(dá)較ctrl(-)組明顯降低,siRNA-Smad3(+)組Smad7mRNA的表達(dá)較ctrl(+)組也明顯降低(F=9.787,P=0.02);(4)不同時(shí)間點(diǎn)Smad3蛋白表達(dá)水平均無(wú)明顯變化(均P>0.05);Smad7蛋白表達(dá)與PCR的結(jié)果一致,呈時(shí)間依賴(lài)。
　　結(jié)論：外源性TGF-β1可誘導(dǎo)HSC-T6中Smad7早期短時(shí)高表達(dá);Smad3可能是外源性TGF-β