基因轉染上調Smad7表達對大鼠肝星狀細胞作用的實驗研究.pdf

1、背景和目的：肝星狀細胞（HSC）在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起主導作用。TGF-β1/Smads信號轉導通路在肝纖維化形成中具有重要作用。Smad7是TGF-β1/Smads信號轉導通路中的主要抑制性調控蛋白，可拮抗TGF-β1的致肝纖維化作用。本實驗研究了Smad7對肝星狀細胞（HSC）α1（I）、α1（III）前膠原基因轉錄的作用和Smad7對HSC凋亡及調節(jié)膠原降解有關酶類的作用。 方法：應用Fugene6介導Smad7質粒

2、轉染體外培養(yǎng)的HSC-T6，繼續(xù)培養(yǎng)48小時，同時使用 Realtime-PCR 、RT-PCR方法鑒定轉染結果和檢測Smad7質粒組、正常對照組、空載質粒對照組α1（I）、α1（III）前膠原和TIMP-1 、MMP-13 mRNAmRNA水平； Westeron blot 檢測三組TIMP-1 、MMP-13蛋白水平； Hoechest33258熒光染色及流式細胞儀檢測Smad7質粒組和空載質粒對照組HSC凋亡。 結果：與

3、正常對照組和空載質粒對照組相比，Smad7質粒轉染HSC-T6細胞48h后，Smad7mRNA水平顯著增高(P<0.01)，α1（I）前膠原mRNA表達明顯下降(P<0.01)，但α1 （III）前膠原基因表達無明顯改變(P>0.05)。三組TIMP-1 、MMP-13 mRNA及蛋白水平均無明顯改變(P>0.05)。HSC凋亡率在Smad7質粒組和空載質粒對照組間無顯著差異（P >0.05 ）。 結論：（1）Smad7質粒在