重組轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β3和-β1基因?qū)Υ笫蟾涡菭罴?xì)胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1表達(dá)的影響及意義.pdf

1、目的:構(gòu)建TGF-β3和TGF-β1基因,觀察其對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)的MMP-2、MMP-9及TIMP-1表達(dá)的影響。
　　方法:1.基因的合成:構(gòu)建TGF-β3表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β3)和TGF-β1表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β1)。2.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的表達(dá):通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法,將pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1分別及共同轉(zhuǎn)染 HSC-T6細(xì)

2、胞,熒光定量PCR法和Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h、MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表達(dá)。3.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的表達(dá):pcDNA3.1(+)-TGF-β1轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞,經(jīng)G418篩選建立高表達(dá)TGF-β1的HSC-T6細(xì)胞克隆,pcDNA3.1(+)-TGF-β3轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆,熒光定量PCR法和Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后48h MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和

3、蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.pcDNA3.1(+)-TGF-β1轉(zhuǎn)染細(xì)胞后MMP-2和TIMP-1 mRNA及蛋白的表達(dá)較空白組及對(duì)照組明顯增高(P<0.05);MMP-9mRNA及蛋白的表達(dá)與空白組及對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P>0.05)。pcDNA3.1(+)-TGF-β3轉(zhuǎn)染細(xì)胞后MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表達(dá)和TIMP-1 mRNA的表達(dá)與空白組及對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P>0.05),但TIMP-1蛋白表達(dá)較空

4、白組及對(duì)照組明顯增高(P<0.05)。共轉(zhuǎn)染組MMP-2 mRNA及蛋白表達(dá)較空白組和對(duì)照組明顯增加(P<0.05);MMP-9 mRNA及蛋白的表達(dá)無(wú)明顯改變(P>0.05);TIMP-1mRNA及蛋白的表達(dá)較 TGF-β1轉(zhuǎn)染組明顯下降(P<0.05)。2.pcDNA3.1(+)-TGF-β3轉(zhuǎn)染克隆細(xì)胞后,MMP-2mRNA及蛋白表達(dá)與克隆組相比無(wú)明顯差異(P>0.05);MMP-9mRNA及蛋白表達(dá)較克隆組明顯增加(P<0.05

5、);TIMP-1mRNA及蛋白表達(dá)較克隆組明顯下降(P<0.05)。
　　結(jié)論:TGF-β1單獨(dú)轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞后,MMP-2和TIMP-1表達(dá)增加;TGF-β3單獨(dú)轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,MMPS無(wú)明顯變化,TIMP-1蛋白表達(dá)增加;TGF-β3與TGF-β1共轉(zhuǎn)染細(xì)胞可增加MMP-2和抑制TIMP-1表達(dá);TGF-β3轉(zhuǎn)染克隆組細(xì)胞可增加MMP-9和抑制TIMP-1的表達(dá)。提示重組的TGF-β3基因可能通過(guò)促進(jìn)MMP-2或MMP-9的