MMP-7、MMP-9及TIMP-1在喉癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：喉癌占全身癌腫的1％-5％。腫瘤的浸潤與轉移是惡性腫瘤的主要生物學特征，也是影響預后的決定性因素，所以腫瘤轉移標志物的研究成為近年來研究的熱點?；|金屬蛋白酶(MMPs)就是腫瘤轉移的標志物之一。 MMPs是細胞分泌的一組Zn++依賴性蛋白酶，在生理環(huán)境中能達到其高活性，可消化細胞外基質(extracellularmatrix，ECM)及基底膜(basementmembranes，BM)的所有成分。MMP-7是一種基質溶解

2、酶，具有高度蛋白溶解能力及廣泛的底物特異性，可激活多種ECM，并在腫瘤血管形成中發(fā)揮重要作用；MMP-9參與ECM的降解與重建，故義稱基質因子。MMP-7和MMP-9的表達與腫瘤細胞的侵襲及轉移呈正相關。MMPs存在特異性抑制因子基質金屬蛋白酶組織抑制劑(TissueInhibitorMetalloproteinase，TIMPs)。TIMPs可與MMPs形成1∶1復合體MMP-TIMP，從而抑制其活性。但到目前為止，關于TIMPs與腫

3、瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉移的關系，目前國內(nèi)外的研究結果還不一致。有的研究表明TIMPs的表達水平與腫瘤的侵襲轉移具有明顯的負相關性，也有許多研究表明，TIMPs的超表達與惡性腫瘤的侵襲轉移行為呈正相關。 本研究應用流式細胞術(FCM)檢測喉癌組織、癌旁組織及正常喉粘膜組織中MMP-7、MMP-9及TIMP1的表達，探討此三種蛋白在喉癌的發(fā)生、發(fā)展及轉移過程中的作用及相關性，尋找可能預測喉癌的發(fā)生、轉移及預后的腫瘤標志物，用以指導

4、臨床。 方法： 1.材料選擇2004年11月-2005年11月，于河北醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院耳鼻喉-頭頸外科住院手術治療的50例原發(fā)喉癌患者新鮮手術切除癌組織及50例相應癌旁組織(距腫瘤邊緣0.5cm)與非喉部疾病患者的正常喉黏膜組織16例。所有組織取材后即用70％酒精固定，40c冷藏保存。 2.FCM方法一抗：鼠抗人基質金屬蛋白酶7單克隆抗體(IgG2b)；羊抗人基質金屬蛋白酶9單克隆抗體(C-20)；鼠抗人金屬

5、蛋白酶組織抑制因予1單克隆抗體(IgM)。二抗：羊抗鼠FITC-IgG抗體。 3.結果判定MMP-7、MMP-9及TIMP-1表達的蛋白定量分析：以熒光指數(shù)(FI)表示三種蛋白表達的相對含量。公式如下： 均道值=1ogX-mode×340FI=實驗樣品的均道值/對照樣品的均道值 陽性結果的判定：腫瘤組織的FI值大于正常組織細胞的-XF1±2S為陽性(TIMP-1FI＞0.74，MMP-9＞1.06，MMP-7＞0

6、.88)，反之為陰性。 4.統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)經(jīng)Excell數(shù)據(jù)庫整理，應用SAS6.12統(tǒng)計軟件包進行方差分析，Q檢驗，t、t’檢驗，X2檢驗，F(xiàn)isher精確計算和多元回歸分析。以P≤0.05為差異在統(tǒng)計學上有顯著性意義，P≤0.01為差異在統(tǒng)計學上有非常顯著性意義。 結果： 1MMP-9的表達 MMP-9在喉癌組織中的表達量(FI=1.24)明顯高于癌旁組織(FI=1.05)(P=0.024)和正常粘

7、膜組織(FI=1.00)(P=0.000)。喉癌組織中的陽性表達率(100％)也高于癌旁組織(72％)(P=0.001)和正常粘膜組織(0％)(P=0.000)，均具有非常顯著性統(tǒng)計學差異；癌旁組織和正常喉粘膜組織間的表達差異無統(tǒng)計學意義(P=0.088)。 喉癌組織中，MMP-9在淋巴結轉移組(N+)的表達量(FI=1.42)和陽性表達率(100％)與無淋巴結轉移組(N0)(FI=1.17)(p=0.000)，(72％)(p=

8、0.070)相比，N+組的表達量明顯高于N0組，具有非常顯著統(tǒng)計學差異，定性表達兩組沒有顯著統(tǒng)計學意義；MMP-9在不同臨床分期、臨床分型、性別、年齡中的表達量和陽性表達率均無統(tǒng)計學差異。 2MMP-7的表達 MMP-7在喉癌組織中的表達量(FI=1.25)明顯高于癌旁組織(FI=1.03)(P=0.000)及正常喉粘膜組織(FI=1.00)(P=0.000)，喉癌組織中的陽性表達率(80％)也高于癌旁組織(2％)，(P

9、=0.001)和正常粘膜(0％)(P=0.001)均具有非常顯著性統(tǒng)計學差異；癌旁組織和正常喉粘膜組織間的表達差異無統(tǒng)計學意義。 喉癌組織中，MMP-7在N+組的表達量(FI=1.31)和陽性表達率(100％)與N0組的表達量(FI=1.22)和陽性表達率(72％)相比，定量表達有非常顯著的統(tǒng)計學差異(t=8.019，P=0.000)，N+組中表達量高于N0組，但陽性表達率兩組無明顯差異(X2=3.280，P=0.070)。MM

10、P-7在不同臨床分期、臨床分型、性別、年齡中的表達量和陽性表達率均無統(tǒng)計學差異。 3TIMP-1的表達 TIMP-1在喉癌組織中的表達量(FI=0.85)及陽性表達率(56％)明顯低于癌旁組織中的表達量(FI=0.97)(t=12.393，P=0.000)及陽性表達率(84％)(X2=9.333，P=0.002)和正常喉粘膜組織(FI=1.00)(t=-3.189，P=0.003)及陽性表達率(88％)(X2=5.198

11、，P=0.023)，均具有非常顯著統(tǒng)計學差異或顯著統(tǒng)計學差異；癌旁組織和正常喉粘膜組織間的表達差異無統(tǒng)計學意義。 喉癌組織中，TIMP-1在N+組的表達量(FI=0.78)和陽性表達率(0％)與N0組的表達量(FI=0.88)及陽性表達率(78％)相比，N+組中表達量和陽性表達率均明顯低于N0組。表達量有顯著統(tǒng)計學差異(t=-1.9202，P=0.021)，陽性表達率有非常顯著統(tǒng)計學差異(X2=24.747，P=0.001)。在

12、臨床Ⅰ、Ⅱ期組的表達量(FI=0.90)和陽性表達率(75％)與臨床Ⅲ、Ⅳ期組(FI=0.75)和陽性表達率(22％)相比，表達量(t=-2.083，P=0.020)具有顯著統(tǒng)計學差異，陽性表達率(X2=24.747，P=0.001)，具有非常顯著統(tǒng)計學差異，臨床Ⅲ、Ⅳ期組的表達量及陽性表達率明顯低于臨床Ⅰ、Ⅱ期組。TIMP-1在不同臨床分型、性別、年齡中的表達量和陽性表達率均無統(tǒng)計學差異。 4以喉癌組織中MMP-9和MMP-7

13、的表達為自變量，TIMP-1的表達為因變量，進行多元線性回歸分析，三者間表達無相關性。 結論： 1MMP-9、MMP-7及TIMP-1在喉癌組織、癌旁組織及正常喉粘膜組織中均有表達。 2MMP-9、MMP-7在喉癌組織中的定量及定性表達均高于癌旁組織和正常喉粘膜組織，癌旁組織和正常喉粘膜組織的表達無差別。 3TIMP-1在喉癌組織中的定量及定性表達均低于癌旁組織和正常喉粘膜組織，癌旁組織和正常喉粘膜組織的

14、表達無差別。 4TIMP-1在喉癌組織中的表達與淋巴結轉移及臨床分期有關，淋巴結轉移組和臨床Ⅲ、Ⅳ期組的定量及定性表達分別低于無淋巴結轉移組和臨床Ⅰ、Ⅱ期組；但其表達與臨床分型、患者年齡幾患者性別無關。 5MMP-9及MMP-7在喉癌組織中的定量表達與淋巴結轉移有關，在有淋巴結轉移組中的表達均高于無淋巴結轉移組，定性表達在兩組間均無差別；兩者定量及定性表達與臨床分期、臨床分型、患者年齡及性別均無關。 6MMP-9