胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2對(duì)U251細(xì)胞增殖和ERK1-2磷酸化及核轉(zhuǎn)移的促進(jìn)作用.pdf

1、前言: 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2(IGFBP-2)是胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)系統(tǒng)的成員之一，由于其在全身多系統(tǒng)的多種惡性腫瘤中表達(dá)明顯增高，近些年來(lái)倍受學(xué)術(shù)界的矚目。研究顯示，其可能是一種獨(dú)立的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和侵襲。DNA微陣列和組織芯片技術(shù)證實(shí)，IGFBP-2在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)中過(guò)表達(dá)，IGFBP-2的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的惡性程度成正相關(guān)，提示IGFBP-2在膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展中發(fā)揮了重

2、要作用，而其在GBM發(fā)生、發(fā)展中所起的作用尚未十分明確。細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)是一組絲/蘇氨酸蛋白激酶，能夠被細(xì)胞外的信號(hào)分子激活，繼而將細(xì)胞表面的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡和分化。多種胞外刺激可經(jīng)G蛋白偶聯(lián)受體、酪氨酸蛋白激酶受體或離子通道，經(jīng)Raf-MEK-ERK級(jí)聯(lián)信號(hào)激活ERK，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子(如Elk-1、ATF2、C Myc、STAT等)和一些激酶活性，促進(jìn)細(xì)胞增殖、蛋白質(zhì)合成。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤

3、中，ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能夠被多種生長(zhǎng)因子和激素所激活。本實(shí)驗(yàn)旨在探討IGFBP-2對(duì)GBM增殖的影響及可能通過(guò)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1、探討外源性IGFBP-2對(duì)人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U251細(xì)胞增殖的影響。 2、通過(guò)觀察外源性IGFBP-2對(duì)ERK1/2磷酸化及細(xì)胞內(nèi)定位的影響，探索IGFBP-2影響細(xì)胞增殖的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 實(shí)驗(yàn)方法: 1、通過(guò)四唑鹽(MTT)比色試驗(yàn)及相差顯微鏡下

4、觀察，檢測(cè)不同濃度IGFBP-2對(duì)U251細(xì)胞增殖的影響2、用蛋白印記試驗(yàn)檢測(cè)500ng/mlIGFBP-2作用不同時(shí)間對(duì)ERK1/2磷酸化的影響3、通過(guò)免疫熒光染色觀察500ng/mlIGFBP-2作用不同時(shí)間對(duì)磷酸化ERK1/2細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)位的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、各濃度外源性IGFBP-2(125，250，500ng/ml)作用72小時(shí)促進(jìn)U251細(xì)胞增殖，并且外源性IGFBP-2促進(jìn)細(xì)胞增殖具有劑量依賴性，500n

5、g/mlIGFBP-2促增殖效果明顯強(qiáng)于125ng/ml及250ng/ml IGFBP-2，而125ng/ml IGFBP-2和250ng/ml IGFBP-2促增殖效果差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、在U251細(xì)胞中，500ng/mlIGFBP-2作用5min,磷酸化ERK1/2增加近1倍，作用30min,磷酸化ERK1/2增加2倍以上。 3、免疫熒光染色顯示，IGFBP-2作用5分鐘后，磷酸化的ERK1/2顯著增多，500n

6、g/mlIGFBP-2作用30min磷酸化ERK1/2進(jìn)一步增多并且發(fā)生核轉(zhuǎn)移。 結(jié)論： 研究表明，IGFBP-2促進(jìn)了膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251細(xì)胞增殖，活化了ERK1/2，并且促進(jìn)磷酸化ERK1/2細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)位，提示了IGFBP-2在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的絲裂原作用。根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，我們推測(cè)，IGFBP-2可能通過(guò)ERK信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖，從而維持膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的惡性表形。研究同時(shí)提示，抑制IGFBP-2表達(dá)可能作為膠