交變磁場下磁納米載體介導(dǎo)的重組pEGFP-AFP-TK對裸鼠移植性肝癌細(xì)胞殺傷作用的研究.pdf

1、目的:在前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)納米磁流體作為基因載體具有較高的轉(zhuǎn)染效率的基礎(chǔ)上,利用前期準(zhǔn)備好的PEG-PEI/Fe3O4納米磁流體和含有AFP啟動子的自殺基因pEGFP-AFP-TK質(zhì)粒,建立裸鼠移植性肝癌模型,在外加交變磁場的條件下,研究交變磁場對PEG-PEI/Fe3O4納米磁流體轉(zhuǎn)染pEGFP-AFP-TK自殺基因治療肝癌的影響。
　　 方法:建立人原發(fā)性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,將荷瘤裸鼠隨機(jī)分成空白對照組、磁場空白組、純納米磁流

2、體組、純pEGFP-AFP-TK自殺基因組和PEG-PEI/Fe3O4納米磁流體介導(dǎo)的pEGFP-AFP-TK組5組?？瞻讓φ战M不作任何處理;磁場空白組在磁場照射下不作任何處理;其余實(shí)驗(yàn)組分別于裸鼠腫瘤部位直接注射PEG-PEI/Fe3O4納米磁流體、pEGFP-AFP-TK自殺基因和PEG-PEI/Fe3O4納米磁流體轉(zhuǎn)染的pEGFP-AFP-TK質(zhì)粒,同時在裸鼠尾靜脈注射更昔洛韋(GCV)。實(shí)驗(yàn)中的采用的脈沖磁場發(fā)生裝置的頻率為40

3、kHz,磁場強(qiáng)度峰值為5kA/m,作用時間為15min/d,共15d,觀察并記錄7d、15d兩個時段皮下腫瘤的生長情況并做病理學(xué)檢查,用免疫組化法檢測腫瘤微血管密度(MVD)的表達(dá)量,用原位末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測細(xì)胞原位凋亡,用RT-PCR檢測腫瘤鼠心,肝,腎的自殺基因表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:裸鼠皮下成瘤率100％。7d和15d的時候,納米磁流體轉(zhuǎn)染的pEGFP-AFP-TK組的在腫瘤體積、重量、血清中AFP的含量以及腫瘤

4、MVD均低于其他各組;在抑瘤率、細(xì)胞凋亡指數(shù)則明顯高于其他組別;可見在外加交變磁場的作用下,納米磁流體轉(zhuǎn)染的自殺基因組對移植肝癌細(xì)胞的殺傷效果優(yōu)于磁場空白組、純納米磁流體和純自殺基因組。通過RT-PCR檢測腫瘤鼠心、肺,腎部位自殺基因的表達(dá)較弱,而腫瘤組織細(xì)胞處自殺基因表達(dá)明顯。
　　 結(jié)論:在交變磁場作用下,納米磁流體轉(zhuǎn)染的pEGFP-AFP-TK對移植型肝癌裸鼠模型的肝癌細(xì)胞具有明顯的殺傷作用。一定強(qiáng)度的外加磁場對腫瘤的生長