乳酸對大鼠髓核細胞的外基質合成和促進凋亡及自噬水平的影響.pdf

1、目的:
　　椎間盤是無血管的組織結構，椎間盤內存在的無氧酵解是椎間盤組織的主要能量來源。因為無氧酵解作用，椎間盤內部存在一定濃度的乳酸，且有研究表明在退變椎間盤組織內存在較高濃度乳酸。本實驗探討乳酸能否引起髓核細胞的凋亡、自噬和以及對外基質成分的影響。
　　方法:
　　取SD大鼠的髓核細胞進行培養(yǎng)，取第三代鼠髓核細胞，分為三組:2mM乳酸組，6mM乳酸組，未加底物組。筆者用CCK-8檢測細胞活性，用透射電鏡及weste

2、rnbloting法檢測細胞自噬，用TUNEL法及western bloting法檢測細胞凋亡水平，RT-PCR及免疫組化檢測細胞外基質中一型膠原、二型膠原的變化。
　　結果:
　　我們課題組發(fā)現6mM乳酸組細胞活性明顯下降(P＜0.05)。且通過透射電鏡的檢測，可以看到6mM乳酸組細胞細胞質內存在自噬小體。western bloting結果顯示6mM乳酸組細胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率要比2mM乳酸組細胞的高，具有統(tǒng)計學

3、意義。電鏡及western blot結果表明，6mM乳酸可以誘導髓核細胞引起自噬。而且凋亡水平也同時升高:TUNEL結果表明6mM乳酸組細胞凋亡率為28.33±3.05％，統(tǒng)計學上存在意義(p＜0.05);6 mM乳酸組細胞的caspase-3，activedcaspase-3表達升高。研究同時發(fā)現6mM乳酸會引起二型膠原的蛋白表達和mRNA水平降低，一型膠原的蛋白表達和mRNA水平升高，統(tǒng)計有顯著意義(P＜0.05)。
　　結論