高壓氧對(duì)急性一氧化碳中毒大鼠遲發(fā)性腦病影響的研究.pdf

1、部分急性一氧化碳中毒(carbon monoxide poisoning，CO-P)患者在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間表現(xiàn)正常或接近正常的“假愈期”后會(huì)再次出現(xiàn)神經(jīng)、精神病學(xué)方面的表現(xiàn)，發(fā)生急性CO-P遲發(fā)性腦病(delayed neurological sequelae，DNS)。臨床上高壓氧(hyperbaric oxygenation，HBO)對(duì)急性CO-P的治療作用眾所周知，但它對(duì)急性CO-PDNS是否有預(yù)防作用，作用多大，及HBO是否能有效治

2、療急性CO-PDNS，卻爭(zhēng)論不休。為了給臨床提供HBO對(duì)急性CO-PDNS預(yù)防及治療作用基礎(chǔ)研究方面的證據(jù)，我們?cè)谇捌谘芯康幕A(chǔ)上，建立改良的急性CO-P動(dòng)物模型(大鼠)，根據(jù)分組，對(duì)治療組進(jìn)行HBO暴露后，在同一時(shí)間，同等條件下對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)，根據(jù)神經(jīng)功能的變化，評(píng)價(jià)急性CO-P后DNS的發(fā)生情況；取動(dòng)物腦組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)及免疫組化研究，評(píng)價(jià)HBO對(duì)組織細(xì)胞的保護(hù)作用。力圖從行為學(xué)、細(xì)胞及分子水平探討HBO對(duì)急性CO-PD

3、NS的發(fā)病情況等方面的影響，并分析其可能的影響機(jī)制；闡述HBO在預(yù)防和治療急性CO-PDNS中的重要作用，為臨床提供相關(guān)的科學(xué)依據(jù)，并為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。
　　 目的:探索建立能有效增加大鼠DNS發(fā)生率的急性CO-P模型，改進(jìn)急性CO-PDNS是否發(fā)生的評(píng)估條件；觀察大鼠DNS的發(fā)病情況、病理形態(tài)學(xué)改變及髓鞘堿性蛋白(myelinbasicprotein，MBP)的表達(dá)情況，揭示HBO對(duì)急性CO-PDNS的影響，從而探討HBO

4、對(duì)急性CO-PDNS預(yù)防及治療的可能機(jī)制。
　　 方法:本研究采用腹腔注射純品CO氣體進(jìn)行染毒的方法建立大鼠急性CO-P模型。雄性SD大鼠48只，體重400g左右，在Morris水迷宮基礎(chǔ)訓(xùn)練篩選后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組)、急性一氧化碳中毒組(CO-P組)、急性一氧化碳中毒高壓氧治療組(HBO組)，按120ml/kg腹腔注射純品CO氣體，隨后每隔4小時(shí)，按首劑量一半進(jìn)行追加注射，共追加4次。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)碳氧血紅蛋白(carbo

5、nylhemoglobin，COHB)含量，觀察大鼠神志行為改變。對(duì)HBO組大鼠進(jìn)行HBO治療，在DNS發(fā)病潛伏期內(nèi)(2～21天)對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)估，采用Morris水迷宮測(cè)試，隔天進(jìn)行一次，以連續(xù)2次逃逸潛伏期復(fù)升認(rèn)定為發(fā)生DNS。于染毒后第21天取大鼠腦組織(海馬區(qū))制作石蠟組織切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色，觀察其組織形態(tài)學(xué)變化；利用免疫組化技術(shù)(immunohistochemistry，IHC)檢測(cè)海馬區(qū)MBP含量；利用蛋白免疫

6、印跡(Western Blotting，WB)檢測(cè)各組大鼠腦組織中MBP的表達(dá)情況，ImageJ圖像分析軟件分析結(jié)果；將以上檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行組間比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠急性CO-P模型的建立：分次腹腔注射純品CO氣體后，大鼠均在15min內(nèi)出現(xiàn)不同程度的腦損傷：有躁動(dòng)不安，呼吸急促、撞籠，痙攣、四肢癱軟等表現(xiàn)。碳氧血紅蛋白檢測(cè)：COHB％>50％，持續(xù)16小時(shí)以上。
　　 2、Morris水迷

7、宮檢測(cè)：CO-P組大鼠在第7天、第14天、第21天統(tǒng)計(jì)DNS的發(fā)生例數(shù)分別為：3例(第1-7天內(nèi))、5例(第8-14天內(nèi))和1例(第15-21天內(nèi))；同時(shí)段內(nèi)HBO組DNS的發(fā)生例數(shù)分別是：2例、2例和0例。至染毒后第21天HBO組DNS的發(fā)病率明顯低于CO-P組(P<0.05)；對(duì)已發(fā)生DNS的大鼠，通過(guò)將其復(fù)升后平均成績(jī)與該只大鼠21天的平均成績(jī)之差比較，結(jié)果表明：HBO組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力高于CO-P組(P<0.05)。
　　

8、 3、Western Blotting分析結(jié)果表明CO-P組大鼠腦組織MBP水平明顯低于HBO組(P<0.05)；以上兩組大鼠腦組織MBP水平均低于NC組(P<0.05)。
　　 4、HE染色觀察大鼠海馬組織可見(jiàn)，CO-P組和HBO組均有不同程度的神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，表現(xiàn)為細(xì)胞排列雜亂，胞體縮小，胞核深染。CO-P組細(xì)胞損傷程度較HBO組嚴(yán)重。
　　 5、IHC染色結(jié)果觀察發(fā)現(xiàn)，腦組織海馬區(qū)MBP平均累計(jì)光密度值(IOD