高遷移率組蛋白-1及其受體在塵肺發(fā)病中的作用.pdf

1、目的:探討高遷移率組蛋白1（high mobility group box protein1 HMGB-1）、可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（soluble receptor of advanced glycation end-productssRAGE）在煤工塵肺發(fā)病中的作用，研究二氧化硅(SiO2)刺激人支氣管上皮細(xì)胞（16 hunman bronchial epithelia,16HBE）對(duì)晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(receptoro

2、f advanced glycation end-products RAGE)及配體-鈣粒蛋白(S100)、HMGB-1的影響。
　　 方法:1.選擇西山礦務(wù)局接觸煤矽塵20-35年的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期煤矽肺病人作為研究對(duì)象，健康對(duì)照選擇對(duì)象為同一煤礦的未接塵人群。對(duì)研究對(duì)象行靜脈采血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)量血清中HMGB-1、sRAGE的表達(dá)。同時(shí)檢測(cè)研究對(duì)象的肺通氣功能。2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的16HBE細(xì)胞用100μg

3、/mlSiO2刺激培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分為3組:只加無血清培養(yǎng)液空白對(duì)照組;陰性對(duì)照組;加入100μg/mlSiO2刺激培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組，觀察4h、24h、48h，每組設(shè)四個(gè)平行對(duì)照。采用熒光免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)測(cè)定RAGE、S100的表達(dá);Western blot技術(shù)測(cè)定HMGB-1的蛋白含量。
　　 結(jié)果:1.煤工塵肺血清實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:
　　 1)病例組與健康對(duì)照組相比:煤工塵肺患者血清中的sRAGE含量均高于正常對(duì)照組，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，隨著煤工塵肺期別的增高sRAGE表達(dá)量增加，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2) HMGB1在健康對(duì)照組與煤工塵肺患者中均有表達(dá)，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在不同的煤工塵肺期別中，HMGB1在Ⅰ、Ⅱ期時(shí)表達(dá)升高但在Ⅲ期煤工塵肺中出現(xiàn)降低，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3)肺通氣功能指標(biāo)FVC、FEV1/FVC、FEV1顯示:隨著煤工塵肺期別的增加，肺通氣

5、量減少，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。肺通氣功能指標(biāo)FVC、FEV1/FVC、FEV1與煤工塵肺患者血清中HMGB1濃度相關(guān)性分析顯示:HMGB1與肺功能損害在Ⅰ、Ⅱ期煤工塵肺病人中具有一定的平行關(guān)系，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)分析，Ⅰ期煤工塵肺中HMGB1與肺功能FVC、FEV1/FVC、FEV1的相關(guān)系數(shù)分別為-0.764、-0.540、-0.812，(P＜0.05)。Ⅱ期煤工塵肺中HMGB1與肺功能FVC、 FEV1/FVC、FEV1

6、的相關(guān)系數(shù)分別為-0.825、-0.512、-0.843，(P＜0.05)。兩期煤工塵肺中除FEV1/FVC外HMGB1與肺功能均有顯著性的負(fù)相關(guān)。
　　 2.SiO2刺激培養(yǎng)16HBE細(xì)胞結(jié)果顯示:
　　 1)100μg/mlSiO2實(shí)驗(yàn)組S100含量顯著增加，并隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組S100的表達(dá)均高于空白對(duì)照組，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)。
　　 2)

7、每個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)組RAGE的平均熒光光密度值低于空白對(duì)照組，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)RAGE的表達(dá)值降低，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)。
　　 3)實(shí)驗(yàn)組HMGB1的表達(dá)均高于空白對(duì)照組，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)HMGB1表達(dá)量在4h、24h出現(xiàn)增高，但在48h出現(xiàn)降低，差異有醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:1.sRAGE在正常人

8、及煤工塵肺患者血清中均有表達(dá)，與煤工塵肺期別升高而升高并存在時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。HMGB1在正常人中有表達(dá)，與煤工塵肺病理過程存在密切關(guān)系。職業(yè)性接觸煤矽塵造成肺通氣功能顯著降低，隨煤工塵肺期別的增高，肺通氣功能呈進(jìn)行性下降。
　　 2.RAGE在正常人支氣管上皮細(xì)胞膜上有表達(dá)，SiO2的刺激作用可以降低其表達(dá)。
　　 3.SiO2能誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞分泌S100，且隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)，分泌增多。HMGB1在煤工塵肺前期呈進(jìn)行性