高遷移率族蛋白1在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達(dá)及作用機(jī)制.pdf

1、慢性鼻竇炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)是鼻腔和鼻竇黏膜的慢性炎癥性病變,通常與感染(病毒、細(xì)菌、真菌等)、變態(tài)反應(yīng)和粘液纖毛傳輸功能障礙等多種因素共同作用的結(jié)果。組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)表現(xiàn)為上皮細(xì)胞損傷,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和上皮下層水腫。廣義而言,炎癥是一種機(jī)體對(duì)感染和損傷的自我保護(hù)機(jī)制,而炎性細(xì)胞的長(zhǎng)期浸潤(rùn),且不斷釋放的炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子(如IL-5、IL-8、TNF-α

2、、IFN-γ和RANTES等)相互作用,促進(jìn)鼻黏膜局部炎癥反應(yīng)不斷循環(huán)擴(kuò)大。
　　近年來(lái),研究發(fā)現(xiàn)新的“晚期炎性因子”高遷移率族蛋白1(High mobility group box 1,HMGB1)在炎癥網(wǎng)絡(luò)中的起到關(guān)鍵作用,它可以直接作用于各種炎性細(xì)胞(包括中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞),誘導(dǎo)其釋放多種促炎性或炎性介質(zhì),啟動(dòng)機(jī)體的天然和獲得性免疫過(guò)程。已有研究表明,HMGB1在COPD患者的呼吸道上皮細(xì)胞中和變應(yīng)性鼻炎患者的鼻腔分

3、泌物中過(guò)表達(dá),但是作用機(jī)制尚未被闡述。本研究,我們擬用免疫組化、Western blot、RT-PCR等實(shí)驗(yàn)方法探討HMGB1在CRSwNP中的作用和意義,加深我們對(duì)CRSwNP發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí),為CRSwNP的治療提供新的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　第一部分HMGB1在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達(dá)及意義
　　目的:研究HMGB1在慢性鼻竇炎伴鼻息肉及正常鼻黏膜中的表達(dá)水平,以探討其在鼻息肉形成過(guò)程中發(fā)揮的作用。
　　方法:對(duì)4

4、1例鼻息肉組織及9例正常鼻黏膜組織分別進(jìn)行免疫組化、Western blot和RT-PCR法檢測(cè)HMGB1、IL-5、IL-8、TNF-α及其mRNA水平。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化顯示HMGB1蛋白在嗜酸性粒細(xì)胞性和非嗜酸性粒細(xì)胞性鼻息肉均較正常對(duì)照組高;
　　2.Western blot顯示HMGB1蛋白水平在嗜酸性粒細(xì)胞性鼻息肉明顯高于正常對(duì)照組和非嗜酸性粒細(xì)胞性鼻息肉(P值分別為0.044,0.001);<

5、br>　　3.HMGB1 mRNA,IL5,IL8和TNF-αmRNA在嗜酸性粒細(xì)胞性鼻息肉中表達(dá)上調(diào),但在非嗜酸性粒細(xì)胞性鼻息肉和正常對(duì)照組中相似;
　　4.HMGB1 mRNA與IL5,IL8,TNF-αmRNA存在正相關(guān)性(rs分別為0.665,0.771,0.724;P值均<0.001);
　　5.HMGB1 mRNA與組織浸潤(rùn)嗜酸性粒細(xì)胞和血嗜酸性粒細(xì)胞存在較弱的正相關(guān)性(rs分別為0.149,0.225;P值分別

6、為0.012,0.001)。
　　結(jié)論:HMGB1蛋白可能參與了慢性鼻竇炎伴鼻息肉的炎性反應(yīng)過(guò)程,并與不同亞型相關(guān),可作為指導(dǎo)慢性鼻竇炎伴鼻息肉的治療和評(píng)價(jià)療效的潛在指標(biāo)。
　　第二部分脂多糖對(duì)人鼻黏膜上皮細(xì)胞HMGB1表達(dá)的影響及意義
　　目的:觀(guān)察脂多糖誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細(xì)胞HMGB1蛋白的表達(dá)、移位和釋放的影響。
　　方法:以不同濃度的脂多糖(lipopolysaacharides,LPS)作用于原代

7、培養(yǎng)的鼻息肉上皮細(xì)胞,檢測(cè)其對(duì)上皮細(xì)胞HMGB1的表達(dá)及釋放情況。分別于0、12、24、48、72h用免疫熒光法觀(guān)察細(xì)胞中HMGB1的定位和移位,WesternBlot檢測(cè)細(xì)胞中HMGB1蛋白變化趨勢(shì)。
　　結(jié)果:與對(duì)照組比較,LPS誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細(xì)胞24h后,免疫熒光法顯示HMGB1蛋白從胞核向胞漿移位,并隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)胞質(zhì)中HMGB1的表達(dá)逐漸增加;在時(shí)間依賴(lài)性實(shí)驗(yàn)中,100μg/ml LPS刺激上皮細(xì)胞24h、