沉默信號調節(jié)因子在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達.pdf

1、慢性鼻竇炎伴鼻息肉( chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)是耳鼻喉科的常見疾病,為鼻-鼻竇黏膜的慢性炎癥性病變,在病理上主要表現(xiàn)為鼻竇和鼻腔粘膜炎性改變,并有水腫。鼻息肉發(fā)病率高,且容易復發(fā),最新的歐洲鼻竇炎和鼻息肉診療意見書報道每年鼻息肉患病率可達10.9％,雖經鼻內鏡手術與局部糖皮質激素治療,仍有20%左右復發(fā),是目前鼻科疾病治療的一大難點。鼻息肉給患者生活、學習、工作造

2、成諸多的障礙,給社會造成嚴重的影響和沉重的負擔。鼻息肉治療和預防成為亟待解決的一項重大的醫(yī)學和社會問題。
　　慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)病機制至今未完全闡明,目前認為其發(fā)病原因是局部微環(huán)境中的炎癥性反應,多種細胞因子在局部病灶內長期存在并使組織發(fā)生一系列的病理變化。近年來研究發(fā)現(xiàn)一些內源性蛋白或外源性蛋白可通過病原相關分子模式受體結合被免疫細胞識別,刺激下游的信號通路,促進炎性因子分泌,從而發(fā)揮了炎癥反應。目前,已知的DAMPs家族,

3、如PLUNC和HMGB1。前期,我們研究發(fā)現(xiàn)HMGB1蛋白在鼻息肉組織中較正常鼻黏膜組織中表達增高,體外脂多糖可以誘導鼻黏膜上皮細胞細胞核內 HMGB1蛋白的主動轉移和釋放,這提示HMGB1可以從鼻黏膜上皮細胞內被釋放出來,通過激活其他細胞參與免疫應答或炎癥反應,從而參與鼻息肉的慢性炎癥過程。但HMGB1蛋白從細胞核內向細胞質的移位和釋放的調節(jié)機制尚未闡明。Scaffidi等人研究發(fā)現(xiàn),乙?；富钚栽鰪姇е录毎藘菻MGB1高乙?；?

4、從而引起HMGB1釋放至細胞質內,然后以分泌性溶酶體為載體,將HMGB1分泌到胞外,進而參與炎癥的發(fā)生。根據以上的理論,我們將從具有去乙?；饔玫某聊畔⒄{節(jié)因子入手,了解其在鼻黏膜組織中的表達和作用,初步探討沉默信息調節(jié)因子參與調節(jié)HMGB1蛋白功能。沉默信息調節(jié)因子( silent information regulator2, Sir2)是依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的第三類組蛋白去乙?；浮Ｐ陆麼ature等文獻報道沉默信號調節(jié)因

5、子中Sirtuins蛋白家族是參與調控衰老、氧化應激和炎癥機制的上游信號通路,在呼吸道上皮細胞中病原感染和細胞衰老中起至關重要的作用。鼻息肉的發(fā)病機制中可能也存在經Sirtuins信號傳導通路的干預和調控。本研究通過檢測鼻息肉組織中沉默信號調節(jié)因子1和2(Sirt1,2)的陽性率和陽性細胞數(shù),闡明從組織細胞水平上找到鼻息肉和正常鼻黏膜組織的區(qū)別;通過體外鼻黏膜上皮細胞培養(yǎng),觀察Sirt6在上皮細胞中的功能,從而深入探討他們在鼻息肉發(fā)病中

6、的作用,為進一步改善其預防和治療水平提供理論依據。
　　第一部分 Sirt1和Sirt2在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達
　　目的:研究Sirt1和Sirt2在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達水平,以探討其在鼻息肉形成過程中發(fā)揮的作用。
　　方法:收集鼻息肉組織38例和正常鼻黏膜組織8例,分別進行 Western blot和組織切片免疫組化檢測總Sirt1和Sirt2蛋白表達及其在細胞質、細胞核分布。
　　結果:1.免疫組

7、化顯示Sirt1主要分布在正常鼻黏膜中腺體細胞內,鼻息肉組織中主要分布在浸潤的炎性細胞內,腺體細胞中未見或少見其表達;Sirt2主要分布在上皮細胞漿內,正常對照組明顯高于鼻息肉組。2. Western blot顯示正常對照組的Sirt1和Sirt2蛋白水平明顯高于鼻息肉組(P值均小于0.01)。
　　結論:正常鼻黏膜中有一定量Sirt1和Sirt2表達,其表達降低可能參與了慢性鼻竇炎伴鼻息肉的形成和炎性反應過程。
　　第二部

8、分 RNA干擾抑制Sirt6基因表達對鼻黏膜上皮細胞纖毛分化和HMGB1表達的影響
　　目的:觀察siRNA Sirt6對鼻黏膜上皮細胞纖毛分化和HMGB1表達的影響。
　　方法:脂質體介導的siRNA Sirt6轉染原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細胞后,Western blot檢測鼻黏膜上皮細胞中 HMGB1和 Sirt6蛋白的表達;熒光顯微鏡下觀察Sirt6下調后HMGB1蛋白在細胞中的分布以及纖毛的改變。
　　結果:與未轉

9、染組比較,siRNA Sirt6轉染原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細胞1d,2d和3d后,Western blot法檢測鼻黏膜上皮細胞中Sirt6有高的下調效應,細胞免疫熒光法顯示HMGB1蛋白從胞核向胞漿移位,并且上皮細胞形態(tài)改變,纖毛數(shù)量隨時間延長明顯減少。
　　結論:質體介導的siRNA Sirt6轉染原代培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細胞,能夠下調細胞中Sirt6表達,誘導HMGB1的移位和釋放,纖毛數(shù)量減少,提示Sirt6蛋白在鼻黏膜上皮細胞的