大鼠腦梗死后出血性轉(zhuǎn)化腦損傷機(jī)制的研究及K-,ATP-通道的作用.pdf

1、目的：缺血性腦血管病是常見病、多發(fā)病，病死率和致殘率均高。早期溶栓是急性期腦梗死(cerebral infarction，CI)有效的治療方法，腦梗死后出血性轉(zhuǎn)化(hemorrhagictransformation，HT)是溶栓治療的主要并發(fā)癥之一，為一種特殊類型的缺血性卒中。近年來(lái)，三磷酸腺苷敏感性鉀通道(adenosine triphosphate sensitive potassium channels,KATP通道)成為缺血性卒

2、中研究的熱點(diǎn)之一，研究發(fā)現(xiàn)腦缺血早期KATP通道開放，可能是拮抗缺血性腦損傷一種重要的內(nèi)源性代償機(jī)制。HT在腦梗死區(qū)繼發(fā)出血，與單純的缺血性腦損傷不同，病理過(guò)程較為復(fù)雜。HT后腦組織病理改變及損傷機(jī)制如何，KATP通道是否參與其病理過(guò)程，梗死區(qū)中自身動(dòng)脈血液成分是否會(huì)對(duì)缺血損傷后的腦組織產(chǎn)生進(jìn)一步影響?這些問(wèn)題尚有待于對(duì)HT進(jìn)行更加深入的研究。 建立成功的動(dòng)物模型是疾病研究的基礎(chǔ)，本研究目的在于建立CI模型，然后結(jié)合成熟的腦出血

3、動(dòng)物模型技術(shù)，建立穩(wěn)定的HT大鼠模型，模擬自身動(dòng)脈血對(duì)缺血腦組織的影響。在此基礎(chǔ)上對(duì)HI及CI后神經(jīng)功能缺損、腦水腫及腦組織三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase,ATPase)、琥珀酸脫氫酶(succinic dehydrogenase,SDH)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量進(jìn)行對(duì)比研究，并對(duì)HT后腦組織病理學(xué)改變進(jìn)行觀察，探討HT后繼發(fā)神經(jīng)元損傷的機(jī)制； 同時(shí)應(yīng)用KATP甲

4、通道抑制劑格列苯脲(Glibenclaimide,Gli)進(jìn)行干預(yù)，驗(yàn)證KATp通道是否參與HT的病理過(guò)程。方法：采用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠，隨機(jī)分為HT組、CI組、Gli干預(yù)(Gli+HT,H)組和假手術(shù)(Sham)組。應(yīng)用Longa等的線栓法建立CI大鼠模型。在CI模型基礎(chǔ)上結(jié)合腦出血?jiǎng)游锬Ｐ图夹g(shù)，應(yīng)用兩步法建立.HT大鼠模型：第一步參照Longa等的線栓法制作大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞模型；第二步采用立體定向技術(shù)

5、，將中等量(50 μl)自體尾動(dòng)脈血注入腦梗死區(qū)尾殼核部位。術(shù)后3 h、6 h、12 h和24 h對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，包括Longa評(píng)分法、Berderson評(píng)分法和平衡木評(píng)分法。評(píng)分完畢將動(dòng)物斷頭處死，留取病變側(cè)腦組織分別進(jìn)行含水量測(cè)定及ATPase、SDH、MDA測(cè)定。采用2％2,3,5-三苯基四唑氮紅(triphenyltetrazoliumchloride,TTC)染色大體觀察HT腦組織，蘇木精-伊紅(hemotoxylin

6、-esion,HE)染色光學(xué)顯微鏡觀察及乙酸雙氧鈾和枸櫞酸鉛雙重染色透射電子顯微鏡觀察HT腦組織病理學(xué)觀察。 結(jié)果： 1.HT和CI大鼠均出現(xiàn)不同程度的左側(cè)肢體偏癱和右側(cè)Horner征，術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)HT組、CI組三項(xiàng)神經(jīng)功能評(píng)分均高于Sham組(P＜0.05)，HT組與CI組三項(xiàng)評(píng)分均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 2.HT組和CI組大鼠病變側(cè)腦組織含水量均在術(shù)后3 h開始升高。術(shù)后12 h、24 h HT組病變

7、側(cè)腦組織含水量為(85.16±0.64)％、(85.20±0.63)％，CI組病變側(cè)腦組織含水量為(84.80±0.74)％、(85.47±1.04)％，均明顯升高。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)HT組、CI組病變側(cè)腦組織含水量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 3 病變側(cè)腦組織ATPase活性比較：術(shù)后3 h、6 h HT組與CI組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，術(shù)后12 h、24 h HT組(46.24±8.82，26.84±3.26)高于CI組(27.

8、77±6.14，19.21±3.67)(P＜0.05)。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)GH組(36.65±3.61，27.45±4.65，22.93±7.14，19.60±4.07)均低于HT組(37.86±2.84，45.20±5.27，46.24±8.82，26.84±3.26)(P＜0.01)，術(shù)后3 h、6 h GH組(36.65±3.61，27.45±4.65)低于CI組(36.67±1.25，43.40±4.87)(P＜0.01)，術(shù)后12

9、h、24 h GH組與CI組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 4 病變側(cè)腦組織SDH活性比較：術(shù)后3 h HT組、CI組、GH組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；術(shù)后6 h、12 h HT組(0.54±0.08，0.56±0.05)、CI組(0.56±0.03，0.59±0.03)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，均高于GH組(0.45±0.04，0.47±0.01)(p＜0.05)；術(shù)后24 h HT組(0.55±0.05)高于CI組(

10、0.45±0.07)和GH組(0.44±0.08)(P＜0.05)，CI組、GH組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 5 病變側(cè)腦組織MDA含量比較：術(shù)后12 h HT組(3.96±0.44)低于CI組(5.57±0.51)和GH組(5.62±0.49)(P＜0.01)，術(shù)后24 h HT組、CI組、GH組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 6 HT大鼠腦組織經(jīng)TTC染色后，正常腦組織呈紅色，右側(cè)大腦中動(dòng)脈供血區(qū)呈白色，為梗死區(qū)

11、，在梗死區(qū)中可見一類圓形血腫。 7 大鼠HT后24 h腦組織病理學(xué)觀察可見梗死區(qū)中大量紅細(xì)胞聚集，周圍組織結(jié)構(gòu)疏松，神經(jīng)元退變，間質(zhì)水腫；超微結(jié)構(gòu)病理改變包括線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張等。 結(jié)論：應(yīng)用兩步法制作的HT大鼠模型簡(jiǎn)單易行、穩(wěn)定性好，是基礎(chǔ)研究和治療干預(yù)較為理想的動(dòng)物模型。CI早期繼發(fā)中等量出血的HT與單純CI比較：神經(jīng)功能缺損和腦水腫均未惡化；腦組織ATPase活性、SDH活性及MDA含量所反映的腦損傷程度無(wú)加重