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1、本實(shí)驗(yàn)室以前用cDNA微陣列方法發(fā)現(xiàn)某些分化相關(guān)基因如富含脯氨酸的小蛋白(small proline-rich proteins,SPRRs)、角蛋白(keratins)、cystatin A和involucrin等在食管癌中表達(dá)明顯下調(diào),同時(shí)發(fā)現(xiàn)分化或DNA結(jié)合抑制物1(inhibitorofdifferentiation or DNAbinding 1,Id1)蛋白的表達(dá)上調(diào)。首先,我們借助組織芯片(免疫組織化學(xué)染色)方法驗(yàn)證了Id
2、1和Id2在食管癌組織中的表達(dá),結(jié)果表明Id1和Id2在食管癌的表達(dá)水平明顯高于正常食管上皮組織,部分組織中內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)Id1和Id2。利用RNAi技術(shù)干擾Id1的表達(dá),檢測(cè)了食管癌分化基因的表達(dá),發(fā)現(xiàn)SPRR3蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。 Id屬于HLH轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一,參與細(xì)胞分化及細(xì)胞凋亡。作為轉(zhuǎn)錄的負(fù)調(diào)節(jié)因子,Id與bHLH亞家族或非bHLH蛋白如pRB和Ets結(jié)合成二聚體并抑制其結(jié)合DNA序列。通過(guò)生物信息學(xué)的分析發(fā)現(xiàn)S
3、PRR3啟動(dòng)子區(qū)存在多個(gè)Ets結(jié)合位點(diǎn)。我們構(gòu)建SPRR3啟動(dòng)子區(qū)截短突變體,利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)了Id1及Ets1對(duì)SPRR3轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響,研究表明Id1過(guò)表達(dá)及沉默表達(dá)可以分別促進(jìn)和抑制SPRR3基因的轉(zhuǎn)錄,Ets1過(guò)表達(dá)也可以促進(jìn)SPRR3的轉(zhuǎn)錄活性。Transwell實(shí)驗(yàn)表明Id1沉默表達(dá)可以促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲能力。 本研究首次發(fā)現(xiàn)Id1對(duì)SPRR3表達(dá)的影響,初步探討了Id1對(duì)SPRR3轉(zhuǎn)錄調(diào)控的可能機(jī)制,但
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