在無關allo-HSCT中KIR2DL1高分辨等位基因分布及其表達差異對移植預后的影響.pdf

1、目的：
　　通過建立KIR2DL1高分辨等位基因全長測序的實驗方法,研究中國漢族人群中KIR2DL1高分辨等位基因的分布頻率及與其配體的相關性,探討其在無關異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)遴選供體中的作用;通過流式細胞術(FCM)檢測初治惡性血液病、移植前供者及移植后患者體內供者來源的NK細胞表面KIR2DL1的表達差異,研究其對allo-HSCT預后的影響。
　　方法：
　　通過基因測序(Sequence-

2、based testing,SBT)與特異性引物聚合酶鏈反應(Sequence specific primers,PCR-SSP)的方法對244名中國漢族無關供患者的外周血標本進行KIR基因分型、KIR2DL1高分辨等位基因分型和HLA高分辨基因分型檢測,分析KIR2DL1高分辨等位基因在中國漢族人群中的分布特點及與其配體HLA-C的相關性。通過流式細胞術對2011年3月到2013年9月之間89名無關志愿者的外周血干細胞標本進行KIR2

3、DL1膜蛋白水平的檢測,并對其中48例進行KIR2DL1高分辨等位基因分型檢測,探討KIR2DL1高分辨等位基因型與表型的相關性;通過46例臨床病例分析KIR2DL1高分辨等位基因型與造血干細胞移植預后的相關性;動態(tài)檢測113例患者移植后1M、2M、3M不同時間點NK細胞及KIR2DL1的表達變化,結合移植后臨床資料分析KIR2DL1的表達對移植預后的影響。
　　結果：
　　1.中國漢族人群中KIR2DL1等位基因的分布特點

4、及與其他人種的差異性
　　1)227名個體(454個等位基因)有3名(1.32％)不表達KIR2DL1基因,全長測序在表達KIR2DL1基因的224名個體中發(fā)現(xiàn)3種等位基因,即KIR2DL1*00302、KIR2DL1*00201和 KIR2DL1*00401;表型分布頻率分別為83.70％(380/454)、11.89％(54/454)和3.08％(14/454)。本研究結果顯示中國漢族人與日本人種的KIR2DL1等位基因表型分

5、布相似,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),與北愛爾蘭人和印第安人明顯不同,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2)對KIR2DL1高分辨等位基因與KIR其他功能基因的連鎖分析發(fā)現(xiàn)表達率較高KIR2DL1*00302和KIR2DL1*00201均與KIR2DS1、KIR2DS4、KIR2DL3、KIR3DL1/S1存在連鎖關系,并均具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。
　　2.研究KIR2DL1高分辨等位基因型與HLA-C

6、配體識別及表達的相關性
　　1)224名個體(448個等位基因)的KIR2DL1高分辨結果與HLA-C位點相關性分析顯示:KIR2DL1*00302與HLA-C2和 HLA-C*06:02有相關性(P<0.001),而與HLA-C1無相關性(P>0.001);KIR2DL1*00201和 KIR2DL1*00401與HLA-C1和HLA-C2均無相關性(P>0.001)。
　　2)對其中75名供者為KIR2DL1*00302

7、/00302純合子與相應患者HLA-C位點分析發(fā)現(xiàn)KIR2DL1*00302與HLA-C*01:02組合是產(chǎn)生異源反應活性最常見的受配體組合,與 HLA-C*06:02是最常見的識別受配體組合。
　　3)KIR2DL1*00302、KIR2DL1*00201和KIR2DL1*00401等位基因型的膜表達水平間無明顯差異性(P>0.05)。但通過對KIR2DL1膜表達水平與相應HLA-C配體的研究發(fā)現(xiàn),存在HLA-C1/C2和C2/

8、C2配體組的KIR2DL1表達水平高于C1/C1配體組,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.KIR2DL1膜蛋白表達水平與無關allo-HSCT預后的相關性
　　1)通過隨訪46例接受無關HLA全相合allo-HSCT惡性血液病患者的臨床資料,并未發(fā)現(xiàn)KIR2DL1高分辨等位基因型與臨床預后有相關性(P>0.05)。
　　2)通過動態(tài)檢測113例惡性血液病患者移植后KIR2DL1膜蛋白水平的表達結果表明:初治

9、惡性血液病患者的KIR2DL1表達水平明顯低于正常無關供體的表達,且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。?免疫耐受組患者(n=59)的NK細胞在移植后1M表達水平最高,后逐漸下降,至移植后3M時患者體內NK細胞水平仍高于供體水平,且有統(tǒng)計學差異(P<0.05);KIR2DL1受體基因在移植后1M時表達水平最低,隨時間推移逐漸升高,至3M時重建為供者水平(P>0.05)。早期復發(fā)患者(n=8)的KIR2DL1的表達水平明顯低于同期免疫耐受

10、組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而與移植前患者的表達未見明顯差異性(P>0.05)。④aGVHD組(n=38)的KIR2DL1表達水平均高于同期免疫耐受組,但未見明顯統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：
　　KIR2DL1高分辨等位基因在中國漢族人群中呈明顯偏態(tài)分布,KIR2DL1*00302是最常見的等位基因。KIR2DL1高分辨等位基因與其配體HLA-C2存在連鎖關系,且KIR2DL1*00302與HLA-C*

11、01:02組合是產(chǎn)生異源反應活性最常見的受配體組合,與HLA-C*06:02是最常見的識別受配體組合。識別自身HLA-C2配體的供體較不識別自身配體的供體的KIR2DL1表達水平高。不同KIR2DL1高分辨等位基因型間的表達水平無差異性,KIR2DL1高分辨等位基因型對無關造血干細胞移植預后無明顯影響。移植后動態(tài)檢測KIR2DL1的膜蛋白表達的變化,能預測患者移植后的復發(fā)。移植后NK細胞與其受體KIR2DL1基因免疫重建的時間存在明顯差