Allo-HSCT患者CD8+T細(xì)胞亞群恢復(fù)的監(jiān)測及臨床意義.pdf

1、目的：研究異基因造血干細(xì)胞移植（Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，Allo-HSCT）后T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞亞群在12個(gè)月內(nèi)的恢復(fù)情況，探討其與抗人胸腺細(xì)胞免疫球蛋白（Antithymocyte Globulin， ATG）的應(yīng)用，急性移植物抗宿主病(Acute graft-versus-host disease， aGVHD)的發(fā)生、巨細(xì)胞病毒（Cytomegalo

2、virus，CMV）感染等臨床表現(xiàn)的相關(guān)性，為移植后aGVHD及CMV病毒感染的預(yù)防與監(jiān)測等提供臨床依據(jù)。
　　方法：
　　1選擇2014年2月至2016年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液內(nèi)科病房進(jìn)行Allo-HSCT的患者共44例進(jìn)行回顧性研究分析。
　　2患者臨床情況：1）年齡：中位年齡32.5歲（13-54歲）；其中男性26例，女性18例；2）疾病診斷與分期：急性白血?。ˋL）33例，其中CR1期23例，≥CR2

3、期8例，NR期2例；重型再生障礙性貧血（SAA）4例；骨髓增生異常綜合征（MDS）4例，2例為MDS-RAEBⅠ型，2例為MDS-RAEBⅡ型，IPSS-R分期均為高危組；不典型慢性粒細(xì)胞白血病（aCML）1例，慢性粒細(xì)胞白細(xì)胞加速期（CML-AP）1例；T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤1例。3）觀察截止日期：2016-12-31，中位觀察時(shí)間350天（37-1248天）。4）供受者HLA配型情況：HLA全相合同胞供者（MSD）16例， HLA全相合

4、非血緣供者（MUD）2例，HLA半相合親緣供者（HRD）26例。5）移植方式：親緣供者采用G-CSF動員后的骨髓+外周血干細(xì)胞移植（39/44例）或外周血干細(xì)胞移植（3/44例），非血緣供者采用G-CSF動員后的外周血干細(xì)胞移植（2/44例）。6）預(yù)處理方案：SAA CTX+BU+ATG±FLU，惡性血液病改良BU+CY±ATG。7）回輸干細(xì)胞計(jì)數(shù)（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）：MNC5.88±1.35*10^8/Kg（受者體重）， CD346.02

5、±2.61*10^6/Kg（受者體重）。
　　3對照組選擇：造血干細(xì)胞移植健康供者25例。
　　4檢測時(shí)間：受者移植后+28d、2m、3m、4.5m、6m、9m、12m；對照組 G-CSF動員前。
　　5檢測方法：1）于觀測時(shí)間點(diǎn)采集移植患者與健康供者外周血4ml， EDTA抗凝。流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry, FCM;美國BD公司FACSCantoll流式細(xì)胞儀）檢測T細(xì)胞亞群細(xì)胞數(shù)量變化，由北京海思特臨

6、床檢驗(yàn)所協(xié)助檢測。2）移植患者移植后2個(gè)月內(nèi)，每周兩次外周血4ml，EDTA抗凝。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測CMV-DNA。
　　6抗體組合：T細(xì)胞:CD3、CD8+T細(xì)胞:CD3/CD8、初始CD8+T細(xì)胞:CD3/CD8/CD45RA、記憶CD8+T細(xì)胞:CD3/CD8/CD45RO。
　　7診斷標(biāo)準(zhǔn)：血液病診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[1]。aGVHD的診斷和分級標(biāo)準(zhǔn)符合西雅圖Fred Hutchinson腫瘤中

7、心的分級法[2]。移植后100天內(nèi)為移植早期。外周血CMV-DNA＞2×102拷貝/ml連續(xù)2次為CMV感染。移植后100天內(nèi)CMV陽性定為移植早期CMV感染。
　　8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：計(jì)量資料的組間比較應(yīng)用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)及Mann-Whitney檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的組間比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1臨床情況
　　1.1植入情況44例患者全部成功植入，其中2例血小板植入延遲。粒細(xì)胞

8、植活中位時(shí)間為11天（9-19天），血小板植活中位時(shí)間為12天（6-39天）。
　　1.2感染及并發(fā)癥肺部感染15/44例（34.1％），早期CMV感染25/44例（56.82%），其中一例發(fā)生CMV腦炎；泌尿系感染5/44例（11.36%），出血性膀胱炎9/44例（20.45%），化膿性中耳炎2/44例（4.55%），嚴(yán)重頜面部感染1/44例（2.27%）。aGVHD發(fā)生26/44例（59.1%），其中Ⅲ-Ⅳ度aGVHD者4/4

9、4例（9.1%）。
　　1.3復(fù)發(fā)及死亡復(fù)發(fā)7/44例（15.91%），3例血液學(xué)復(fù)發(fā)，3例基因?qū)W復(fù)發(fā)，1例髓外復(fù)發(fā)。死亡7/44例（15.91%），原發(fā)病復(fù)發(fā)死亡2/44例（4.55%），Ⅲ-ⅣaGVHD死亡3/44例（6.82%），全身炎癥反應(yīng)綜合征合并肺部感染1/44例（2.27%），肝小靜脈閉塞癥（VOD）1/44例（2.27%）。1.4 T細(xì)胞亞群檢測情況對照組25例全部檢測?；颊哂谝浦埠?28d、2m、3m、4.5m、

10、6m、9m、12m分別有40例、35例、31例、27例、23例、13例及14例進(jìn)行了T細(xì)胞亞群檢測。
　　2 T細(xì)胞恢復(fù)情況與對照組相比， T細(xì)胞在移植后+28天下降至最低（768.62±495.6/μl vs1747.6±552.17/μl，P＜0.001），之后逐漸上升，+3m仍明顯低于對照組（P＜0.001），至+6m恢復(fù)至正常水平（1673.36±875.54/μl，P=0.348），+12m仍在正常水平（1902.31±

11、888.84/μl vs1747.6±552.17/μl，P=0.976），提示T細(xì)胞計(jì)數(shù)于移植后6個(gè)月恢復(fù)。3 CD8+T細(xì)胞及亞群的恢復(fù)情況
　　3.1總CD8+T細(xì)胞總CD8+T細(xì)胞恢復(fù)迅速,28天即達(dá)到對照組水平（549.44±356.47/μl vs675.60±253.66/μl，P=0.14），+3m仍在對照組水平，+6m、+9m、+12m已明顯高于正常水平（6m1171.9±526.84/μl、9m1011.67±

12、406.69/μl、12m1214.62±558.4/μl，P值分別為0.000、0.004、0.001）。3.2初始CD8+T細(xì)胞移植后初始CD8+T細(xì)胞恢復(fù)較慢，+28天時(shí)（120.3±71.98/μl vs300.4±125.65/μl， P＜0.001），+3m仍未恢復(fù)（200.71±99.38/μl vs300.4±125.65/μl，P=0.004），至+6m恢復(fù)至正常水平（287.95±183.61/μl vs300.4±

13、125.65/μl，P=0.787），+12m仍在正常水平， P＞0.05。提示移植6個(gè)月后初始CD8+T細(xì)胞穩(wěn)定重建。
　　3.3記憶 CD8+T細(xì)胞+28天記憶 CD8+T細(xì)胞與對照組無差別（288.4±174.45/μl vs258.8±110.73/μl， P=0.828）,+2m明顯升高（487.33±251.86/μl vs258.8±110.73/μl，P＜0.001），此后數(shù)值基本保持穩(wěn)定。提示記憶CD8+T細(xì)胞移

14、植后無明顯減低，可能與異基因抗原刺激有關(guān)，可迅速超過正常水平。
　　4 CD8+T細(xì)胞亞群恢復(fù)與早期CMV感染：移植后25例患者發(fā)生早期CMV感染，中位感染時(shí)間為35天（10-90天）。+28天CMV感染組CD8+T細(xì)胞數(shù)值高于未感染組，2m、3m、4.5m均低于未感染組，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？偧?xì)胞、初始CD8+T細(xì)胞及記憶CD8+T細(xì)胞變化趨勢與之相同，僅+2m時(shí)初始CD8+T細(xì)胞感染組明顯低于未感染組。提示初始CD8+T細(xì)胞重建

15、延遲可能與早期CMV感染相關(guān)。
　　5 CD8+T細(xì)胞亞群恢復(fù)與aGVHD的發(fā)生：移植后共26例患者發(fā)生不同程度的aGVHD，中位發(fā)生時(shí)間為27天（12-90天），22例患者發(fā)生Ⅰ-Ⅱ度aGVHD，4例發(fā)生Ⅲ-Ⅳ度。aGVHD組與無aGVHD組相比，總T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及記憶CD8+T細(xì)胞在+28d、2m均高于無aGVHD組，3m、4.5m、6m低于無aGVHD組，且記憶CD8+T細(xì)胞于+2m明顯高于無aGVHD組（693.1

16、6±442.67/μl vs428±217.69/μl，P=0.042）。初始CD8+T細(xì)胞除+6m外，各觀察點(diǎn)發(fā)生aGVHD組均高于無aGVHD組，但各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示aGVHD發(fā)生時(shí)記憶CD8+T細(xì)胞明顯增高。兩組患者與對照組相比，CD8+T細(xì)胞+28d無aGVHD組明顯低于對照組（P=0.016），而aGVHD組已與對照組無差異。3個(gè)月時(shí)初始CD8+T細(xì)胞數(shù)量aGVHD組已與對照組無差異（P=0.061），而無aGVHD組

17、仍明顯低于對照組（P=0.003），提示aGVHD時(shí)初始CD8+T細(xì)胞增值速度加快。
　　6 ATG的應(yīng)用與CD8+T細(xì)胞亞群
　　6.144例移植患者，35例預(yù)處理期間應(yīng)用ATG，監(jiān)測其+28d、2m、3m各細(xì)胞亞群恢復(fù)情況?？俆細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)，ATG組及未應(yīng)用ATG組前3個(gè)月觀察時(shí)間點(diǎn)無差異。初始CD8+T細(xì)胞于+2m未應(yīng)用ATG組即可恢復(fù)至對照組水平（251.25±136.58/μl vs300.4±12

18、5.65/μl，P=0.296），而應(yīng)用組至+3m仍低于對照組（P＜0.05）。與44例患者+6m恢復(fù)至正常水平相比，可認(rèn)為ATG在移植早期抑制初始CD8+T細(xì)胞恢復(fù)。
　　6.2 HLA全相合移植患者預(yù)處理期間應(yīng)用ATG9/18例，前6個(gè)月各監(jiān)測時(shí)間點(diǎn)，ATG組及未應(yīng)用ATG組相比，總T細(xì)胞及初始CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CD8+T細(xì)胞及記憶CD8+T細(xì)胞值至4.5m ATG組高于無ATG組，記憶性CD8+T細(xì)胞于

19、3m、4.5m時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.03、P=0.006）。其余時(shí)間點(diǎn)因病例數(shù)少，未做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)論：
　　1 Allo-HSCT后CD8+T細(xì)胞及記憶CD8+T細(xì)胞恢復(fù)迅速，1個(gè)月恢復(fù)至正常水平；T細(xì)胞及初始CD8+T細(xì)胞+6m恢復(fù)至對照組水平；移植早期T細(xì)胞恢復(fù)以CD8+T細(xì)胞為主，而CD8+T細(xì)胞中以記憶性T細(xì)胞恢復(fù)為主。
　　2 aGVHD時(shí)記憶性CD8+T細(xì)胞明顯增高，初始CD8+T細(xì)胞增值速度加快