抗病相關基因轉化馬鈴薯及其表達的初步研究.pdf

1、試驗首先建立馬鈴薯的遺傳轉化體系，再用農桿菌介導法將從辣椒中分離獲得的抗菌蛋白基因、非特異性脂轉移蛋白基因和親環(huán)蛋白基因所構建的表達載體對馬鈴薯普通栽培種“津引8號”、“東農303”、“紫花851”進行了遺傳轉化，獲得了抗性再生植株，對所獲得的轉基因苗進行了初步的分子鑒定，為進一步開展轉基因抗病馬鈴薯株系的篩選奠定了基礎。試驗主要結果： (1)以馬鈴薯普通栽培種“津引8號”、“紫花851”、“東農303”的脫毒試管苗的莖段為外植

2、體，“東農303”通過MS+1mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.2mg/LGA3+0.05mg/LKT誘導愈傷組織，Ms+1mg/L6—BA+5mg/LGA3再生不定芽；“津引8號”、“紫花851”通過MS+2mg/L6-BA+0.2mg/LNAA誘導愈傷組織，MS+1mg/L6—BA+5mg/LGA3再生不定芽；以1/2MS作為各馬鈴薯生根培養(yǎng)基。以75mg/L的Kan作為愈傷誘導和分化出芽的選擇壓；以50mg/L的Kan作

3、為生根的選擇壓；以200mg/L進口的Cef作為脫菌抗生素。 (2)根癌農桿菌介導的馬鈴薯遺傳轉化的最佳條件是：莖段外植體在愈傷誘導培養(yǎng)基上預培養(yǎng)2d，農桿菌濃度OD600值為0.5，侵染10min，25℃、黑暗條件下共培養(yǎng)3d。采用前期選擇可提高工作效率。選擇生長狀況良好的外植體；共培養(yǎng)時在培養(yǎng)基中添加50umol/L的AS；預培養(yǎng)和共培養(yǎng)時在培養(yǎng)基中添加2200mg/LCaCl2；均可提高轉化率。 (3)獲得5株“東

4、農303”、3株“紫花851”、6株“津引8號”的轉抗菌蛋白基因的轉化植株；4株“東農303”、5株“紫花851”、5株“津引8號”轉非特異性脂轉移蛋白基因的轉化植株；6株“東農303”、3株“紫花851”、5株“津引8號”轉親環(huán)蛋白基因的轉化植株。PCR檢測表明轉化植株均擴增出相應的基因目的片段，證明基因已導入受體基因組中。 (4)初步的抗性分析表明，部分轉化體對馬鈴薯晚疫病抗性有一定的增強，抗菌蛋白、非特異性脂轉移蛋白和親環(huán)