MARVELD1調(diào)控內(nèi)含子miR-186和miR-335表達(dá)的研究.pdf

1、MARVELD1（MARVEL domain containing1）是本課題組新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)抑癌基因，在多種腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。課題組miRNA芯片表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)MARVELD1表達(dá)變化時(shí)，許多miRNAs也隨其發(fā)生變化，其中hsa-miR-186和hsa-miR-335的表達(dá)存在顯著性的差異。但是，關(guān)于MARVELD1調(diào)控hsa-miR-186和hsa-miR-335的表達(dá)的研究，尚未得到驗(yàn)證，而且其具體調(diào)控機(jī)制也無從

2、獲知。因此，本課題對(duì)MARVELD1調(diào)控has-miR-186和has-miR-335的表達(dá)方式進(jìn)行了初步的探討。
　　在肺癌細(xì)胞中，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR的方法發(fā)現(xiàn) MARVELD1與hsa-miR-186、hsa-miR-335的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)。在外源性表達(dá)MARVELD1的A549細(xì)胞和HepG2細(xì)胞中分析顯示，當(dāng)MARVELD1過表達(dá)之后，hsa-miR-186和hsa-miR-335的表達(dá)均表現(xiàn)為上調(diào)；進(jìn)一步在內(nèi)

3、源性表達(dá) MARVELD1的NCI-H520細(xì)胞和HeLa細(xì)胞中應(yīng)用shRNA干擾 MARVELD1表達(dá)之后，其正相關(guān)性也獲得了證實(shí)。
　　為分析MARVELD1與hsa-miR-186和hsa-miR-335的關(guān)系，本研究首先對(duì)hsa-miR-186和hsa-miR-335進(jìn)行了定位分析，結(jié)果顯示hsa-miR-186和hsa-miR-335都為內(nèi)含子miRNA，其宿主基因分別為ZRANB2和MEST。對(duì)此本研究分析了MARVE

4、LD1與宿主基因的關(guān)系，通過qRT-PCR的實(shí)驗(yàn)檢測宿主基因ZRANB2和MEST的表達(dá)水平，確定MARVELD1可以上調(diào)has-miR-186和has-miR-335的宿主基因的表達(dá)。為探討MARVELD1調(diào)控內(nèi)含子has-miR-186和has-miR-335的機(jī)制，結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)確定MARVELD1可以與宿主基因啟動(dòng)子區(qū)的組蛋白H4K20單甲基化發(fā)生相互作用，進(jìn)而影響宿主基因與內(nèi)含子has-miR-18

5、6和has-miR-335的表達(dá)。
　　本研究進(jìn)一步應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析hsa-miR-186和hsa-miR-335與其預(yù)測靶基因靶向作用關(guān)系，并初步確定CHD7可能是hsa-miR-186的靶基因；CHD7和FBXL10可能是has-miR-335的靶基因。
　　綜上所述，本研究確定 MARVELD1通過下調(diào)組蛋白H4K20單甲基化，從而使得組蛋白H4K20單甲基化與宿主基因MEST和ZRANB2的啟動(dòng)子DNA作用