MARVELD1參與DNA損傷響應(yīng)的功能和機制研究.pdf

1、MARVELD1是一個新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,在多種腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)。前期研究表明細(xì)胞經(jīng)UV、γ射線和多種核酸損傷藥物等處理后,MARVELD1均呈現(xiàn)表達(dá)上調(diào),并且,MARVELD1可以通過調(diào)控p53和p16而抑制細(xì)胞增殖。但是關(guān)于MARVELD1在UV誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)中的作用和分子機制仍知之甚少,因此本課題對MARVELD1在UV誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)中的功能和分子機制進(jìn)行了初步的探討。
　　通過免疫熒光和免疫印跡技術(shù),研究發(fā)現(xiàn)U

2、V能夠誘導(dǎo)MARVELD1表達(dá),并且具有時間和劑量雙重依賴性。彗星電泳實驗結(jié)果顯示MARVELD1能夠促進(jìn)H2O2誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)。同時,克隆存活實驗結(jié)果表明MARVELD1表達(dá)沉默后細(xì)胞對UV的敏感性增加。流式分析結(jié)果顯示UV誘導(dǎo)的細(xì)胞周期G1/S期阻滯不依賴MARVELD1,但是MARVELD1可以促進(jìn)細(xì)胞從UV誘導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯中恢復(fù)。通過免疫熒光技術(shù),我們發(fā)現(xiàn)MARVELD1與XPC以及ssDNA具有UV依賴性共定位。同時,

3、MARVELD1表達(dá)沉默后細(xì)胞內(nèi)包括γH2AX、p53、XPC和PCNA在內(nèi)的多個NER修復(fù)因子的蛋白水平下調(diào),但是對BER修復(fù)通路中的蛋白XRCC1沒有明顯影響。
　　免疫印跡結(jié)果顯示H2O2和UV可以誘導(dǎo)MARVELD1發(fā)生共價修飾。免疫熒光、GST-pulldown和免疫共沉淀結(jié)果共同證實了MARVELD1與SENP3具有相互作用,并且受到UV的調(diào)控。同時,我們MARVELD1參與了UV誘導(dǎo)的組蛋白H4K20的甲基化調(diào)控,U

4、V會導(dǎo)致H4K20me1總蛋白水平下調(diào),H4K20me3總蛋白水平上調(diào),但是對H4K20me2總蛋白水平?jīng)]有影響。MARVELD1表達(dá)沉默會上調(diào)H4K20me1總蛋白水平而降低H4K20me3總蛋白水平,對H4K20me2總蛋白水平?jīng)]有影響。免疫共沉淀結(jié)果顯示MARVELD1與H4K20me1在正常情況下具有相互作用,而在UV照射后這種相互作用消失。
　　綜上所述,研究證實MARVELD1通過募集在DNA損傷位點,并通過調(diào)控γH2