腎虛痰阻與AD的關(guān)系及補(bǔ)腎化痰益智法治療AD的作用研究.pdf

1、目的：
　　阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是以漸進(jìn)性記憶障礙，認(rèn)知功能障礙、人格改變以及語言障礙等神經(jīng)精神癥狀為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是世界上最常見的癡呆性疾病，影響超過1.5億人。隨著我國老齡化人口數(shù)量的增長，加強(qiáng)對阿爾茨海默病病因病機(jī)的研究，并對其開展有效的防治措施及藥物治療，這顯得尤為迫切和重要。因此，本論文在闡述阿爾茨海默病病因病機(jī)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步深入探討補(bǔ)腎化痰益智法臨床應(yīng)用的理論依

2、據(jù)，并以 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對象，研究其代表方——補(bǔ)腎化痰益智方治療AD的作用及機(jī)制，為中醫(yī)藥治療阿爾茨海默病提供堅實的理論基礎(chǔ)和科學(xué)的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、理論探討：通過整理并分析古今相關(guān)文獻(xiàn)對阿爾茨海默病的記載與論述，總結(jié)祖國醫(yī)學(xué)對本病病因病機(jī)的認(rèn)識，探討以腎虛為主的五臟虧虛與阿爾茨海默病的關(guān)系、腎虛與痰阻的關(guān)系，從而進(jìn)一步闡述其病因病機(jī)及臨床的治則治法。
　　2、實驗研究：選用APP/PS

3、1雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型，以Aβ沉積為靶點，從分子生物學(xué)水平研究補(bǔ)腎化痰益智方治療 AD的機(jī)制。通過 Morris水迷宮實驗、穿梭箱實驗、跳臺實驗這三種行為學(xué)檢測方法，觀察小鼠的學(xué)習(xí)記憶力的改變；透射電鏡觀察小鼠海馬 CA1區(qū)神經(jīng)元及突觸的病理改變；免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠海馬 Aβ1-40、Aβ1-42染色改變，免疫組織化學(xué)染色法及Western Blot法觀察Aβ主要生成分泌酶和降解酶（α-分泌酶：ADAM-10，β-分泌酶：BACE1

4、，降解酶：NEP、IDE）的表達(dá)，影響Aβ腦內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的RAGE、LRP1的表達(dá)及海馬NF-κB的表達(dá)。ELISA法檢測IL-1β、TNF-α含量。流式細(xì)胞儀檢測各組小鼠外周血黏附分子含量（CD11a、CD11b、CD18、CD54、CD62L）的變化。
　　結(jié)果：
　　Morris水迷宮實驗顯示，在整個定位航行實驗過程中，與模型組比較，各給藥組小鼠能較快找到逃生平臺，并且隨著訓(xùn)練的時間延長，學(xué)習(xí)趨勢不斷增強(qiáng)，尤以補(bǔ)腎化痰益智方

5、高劑量組效果更為好?？臻g搜索實驗中，與模型組比較，補(bǔ)腎化痰益智方組小鼠的穿越平臺次數(shù)、第一象限時間明顯增加(P＜0.01，P＜0.05)及第一次穿越平臺時間明顯縮短(P＜0.01)。跳臺測試實驗結(jié)果顯示，各給藥組小鼠的潛伏期與模型組比呈明顯縮短，其出錯次數(shù)也較之明顯減少(P＜0.01)。穿梭箱實驗結(jié)果顯示，補(bǔ)腎化痰益智方組小鼠的主動回避次數(shù)較模型組明顯增加(P＜0.01，P＜0.05)，而主動回避潛伏期、被動回避潛伏期明顯縮短(P＜0.

6、01）。說明補(bǔ)腎化痰益智方能較好的改善APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力。
　　透射電鏡觀察，補(bǔ)腎化痰益智方對小鼠海馬神經(jīng)元及突觸有保護(hù)作用；免疫組織化學(xué)染色法結(jié)果顯示與空白組比較，模型組海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Aβ1-40、Aβ1-42染色較深，且模型組偶可見老年斑染色。與模型組比較，各給藥組海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Aβ1-40、Aβ1-42染色較淺。
　　免疫組化、Weston-blot結(jié)果顯示與空白組比較，模型組ADAM-

7、10、NEP、IDE表達(dá)顯著性降低（P<0.05，P<0.01）；BACE1、RAGE、LRP1、NF-κB表達(dá)顯著性升高（P<0.05，P<0.01）。與模型組比較，各給藥組ADAM-10、NEP、IDE表達(dá)顯著性升高（P<0.05，P<0.01）；BACE1無顯著性差異（P>0.05）；而RAGE、LRP1、NF-κB表達(dá)顯著性降低（P<0.05，P<0.01）。
　　ELISA檢測結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組小鼠海馬IL-

8、1β和TNF-α明顯增加（P＜0.01）；與模型組比較，其余各給藥組大鼠海馬 IL-1β和TNF-α明顯減少(P<0.05，P＜0.01)。
　　流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示與空白組比較，模型組小鼠外周血黏附分子CD11a、CD11b、CD18、CD54、CD62L含量均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組外周血黏附分子CD18、CD54含量均明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)，而CD11a、CD11b、C