慢性乙肝病毒感染者血清IFN-γ、IL-4和IL-12的檢測(cè)及臨床意義.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)感染己成為一個(gè)全球性健康問(wèn)題。世界人口的1/3都曾被HBV感染。全球3.5億慢性HBV感染者中1.7億在我國(guó)，其中大約20％要死于肝硬化或肝癌。HBV對(duì)人類(lèi)的生命健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。HBV是HBV相關(guān)疾病的始動(dòng)因素，只有積極抗病毒治療才能明顯改善預(yù)后。但目前尚無(wú)理想抗HBV藥物。恢復(fù)健康的被感染者絕大多數(shù)是憑借自身免疫功能清除了體內(nèi)的HBV。而慢性HBV感染者未能通過(guò)自身免

2、疫功能清除HBV，需要接受抗病毒治療。但并非每位患者都適于抗病毒治療，免疫功能差的患者往往收不到好的抗病毒療效?？梢?jiàn)準(zhǔn)確評(píng)價(jià)慢性HBV感染者的免疫功能是非常重要的。臨床上一般以谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)作為評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能的間接指標(biāo)。但隨著研究的深入有學(xué)者發(fā)現(xiàn)：細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)可以在不損壞肝細(xì)胞的情況下清除胞內(nèi)HBV，該機(jī)制可能在清除胞內(nèi)病毒過(guò)程中起著重要作用。這樣一來(lái)，ALT是否能作為評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能的間接指標(biāo)值得進(jìn)一步探討。拉米夫

3、定等核苷類(lèi)藥物只能抑制HBV DNA的復(fù)制而徹底清除HBV還要靠免疫系統(tǒng)。所以免疫調(diào)節(jié)治療可能是一種有效的抗病毒療法。但在臨床上干擾素(interferon，IFN)等有免疫調(diào)節(jié)作用的抗病毒藥物并沒(méi)有收到理想效果，原因何在?wieland等發(fā)現(xiàn)內(nèi)生性IFN較外源性IFN的抗病毒效果明顯增強(qiáng)。激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)生性免疫調(diào)節(jié)因子或許是一種有效的治療方法。本研究檢測(cè)IFN-γ、IL-4、IL-12三種免疫調(diào)節(jié)因子在慢性HBV感染者血清的水平，分析

4、其與ALT、HBV DNA的相關(guān)性，以了解慢性HBV感染者的免疫功能，并探索改善乙肝抗病毒治療效果的途徑。 方法：收集2006年2月至10月就診于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院消化內(nèi)科的慢性HBV感染者及健康志愿者共62例。作為對(duì)照組的健康志愿者10例，男性7例，女性3例，年齡20～59歲，平均36.1±14.5歲。慢性HBV感染者52例，其中慢性HBV攜帶者11例，慢性乙型肝炎(ChronicHepatitis B，CHB)患者19例，

5、乙型肝炎肝硬化患者22例，男性35例，女性17例，年齡22～68歲，平均45.3±17.6歲。取清晨空腹靜脈血，其中3ml于4℃離心，1000r/min，10min，收集血清后置于冰箱低溫-20℃保存待測(cè)；其余血樣送檢驗(yàn)科進(jìn)行HBV DNA及肝功能檢查。采用雙抗體夾心ELISA法，參照人IL-12、IL-4、IFN-γ雙抗體夾心ABC-ELISA法說(shuō)明書(shū)，每孔加入100ul標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品，在OD<,432>測(cè)值并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔數(shù)值繪制標(biāo)準(zhǔn)

6、曲線，計(jì)算待測(cè)樣品中IL-12、IL-4、IFN-γ的含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X ±SD)表示，用方差分析，直線相關(guān)等統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果： 1.IL-12、IL-4、IFN-γ在對(duì)照組中的水平：IL-12平均水平為(18.10±12.68)，IL-4平均水平為(26.72±23.93)，IFN-γ平均水平為(24.83±15.46)。(單位：pg/ml) 2.IFN-γ在三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的水平：.在

7、HBV攜帶組的IFN-γ平均水平為(46.94±18.57)，慢性乙型肝炎組為(69.15±25.57)，肝炎肝硬化組為(51.59±25.82)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中IFN-Y的水平都高于正常對(duì)照組，結(jié)果均有顯著性差異(p<0.05)。(單位：pg/ml) 3.IL-4在三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的水平：HBV攜帶組平均水平為(101.55±49.63)，慢性乙型肝炎組平均水平為(92.52±28.99)，肝炎肝硬化組平均水平為(97.79±39

8、.44)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中IL-4的水平都高于正常對(duì)照組，結(jié)果有顯著性差異(p<0.05)。(單位：pg/ml) 4.IL-12在三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的水平：HBV攜帶組平均水平為(36.82±24.35)，慢性乙型肝炎組平均水平為(52.03±22.54)，肝炎肝硬化組平均水平為(41.23±22.10)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中IL-12的水平都高于正常對(duì)照組；除HBV攜帶組外結(jié)果均有顯著性差異(p<0.05)。(單位：pg/ml) 5.各

9、組IFN-γ/IL-4水平：對(duì)照組中均值為(1.14±0.39)，HBV攜帶組(0.52±0.21)，慢性乙型肝炎組(0.77±0.28)，肝硬化組(0.55±0.20)。對(duì)照組高于其它三組，結(jié)果有顯著性差異(p<0.05)。 6.慢性HBV感染者不同分組間IFN-γ/IL-4的比較：攜帶組及肝硬化組均值都小于慢性乙型肝炎組，結(jié)果有顯著性差異(p<0.05)；但HBV攜帶組和肝硬化組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 7

10、.HBV攜帶組HBV DNA、IFN-γ和ALT三者之間相關(guān)性分析：HBV DNA與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)(r-0.744，p<0.05)，HBV DNA與ALT無(wú)相關(guān)性(r=0.281，p>0.05)，IFN-γ與ALT之間亦無(wú)相關(guān)性(r=0.092，p>0.05)。 8.慢性乙型肝炎組HBV DNA、IFN-γ和ALT三者之間相關(guān)性分析：IFN-γ與HBV DNA呈負(fù)相關(guān)(r=0.769，p(0.05)：IFN-γ與ALT之間成

11、正相關(guān)(r=0.724，p(0.05)；ALT與HBVDNA呈負(fù)相關(guān)(r=0.705，p(0.05)。 9.慢性HBV感染者IL-12與IFN-γ及HBV DNA相關(guān)性分析：IL-12與IFN-γ呈正相關(guān)(r=0.892，p；0.05)，IL-12與HBVDNA呈負(fù)相關(guān)(r=0.361，p(0.05)。 結(jié)論： 1.慢性HBV感染者IL-4和IFN-γ的水平都較正常對(duì)照組升高，IFN-γ/IL-4值卻較對(duì)照組降低。推測(cè)I

12、FN-γ和IL-4兩個(gè)免疫調(diào)節(jié)因子比例的失調(diào)可能是慢性HBV感染者不能清除乙肝病毒的一個(gè)原因。 2.慢性HBV感染者中慢性乙型肝炎組的IFN-γ/IL-4值高于HBV攜帶組和肝炎肝硬化組。推測(cè)慢性乙型肝炎組免疫功能可能好于HBV攜帶組和肝炎肝硬化組。 3.在慢性HBV攜帶組，血清IFN-γ水平較對(duì)照組升高，TFN-γ與HBV DNA呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。推測(cè)非細(xì)胞溶解機(jī)制可能抑制了HBV的復(fù)制，IFN-γ可能較ALT更適于評(píng)價(jià)該