維甲酸致先天性馬蹄內(nèi)翻足及對(duì)相關(guān)致病基因表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]：通過對(duì)孕10天的SD大鼠進(jìn)行維甲酸灌胃，成功建立了新生鼠的類馬蹄內(nèi)翻足動(dòng)物模型。并分別對(duì)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組新生鼠后肢的形態(tài)學(xué)以及肌肉和軟骨組織中的HoxA9、TBX—3、CASP10基因的表達(dá)進(jìn)行實(shí)時(shí)免疫熒光PCR技術(shù)進(jìn)行測(cè)定和比較，從而探討先天性馬蹄內(nèi)翻足相關(guān)致病基因的表達(dá)與外界環(huán)境因素干預(yù)之間的關(guān)系以及維甲酸的對(duì)先天性馬蹄內(nèi)翻足的作用位點(diǎn)，為該病的病因?qū)W、流行病學(xué)及預(yù)防研究提供新的科學(xué)根據(jù)。 [方法]：(1)選取的SD

2、大鼠交配后，分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組隨機(jī)選取孕SD大鼠2只，于懷孕10天時(shí)以橄欖油灌胃一次。實(shí)驗(yàn)組選取孕SD大鼠6只，于懷孕10天時(shí)以140mg/kg的維甲酸劑量(40mg/ml溶于橄欖油中)灌胃一次。于孕16～18天待孕鼠自然分娩新生幼鼠。(2)兩組所產(chǎn)幼鼠根據(jù)是否出現(xiàn)后肢畸形分為對(duì)照組、畸形組及非畸形組；并分別取后肢軟骨及肌肉組織進(jìn)行RNA抽提、定量。最后進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量 PCR 測(cè)定HoxA9、TBX—3、CASP10 基因的拷

3、貝數(shù)。(3)統(tǒng)計(jì)和比較各組間待測(cè)基因拷貝數(shù)的區(qū)別并討論其意義。 [結(jié)果]：(1)2只對(duì)照組SD孕大鼠共產(chǎn)仔22只，未發(fā)現(xiàn)畸形或死胎。6只實(shí)驗(yàn)組SD孕大鼠中有一只在灌胃后2天死亡，余下可利用5只孕鼠共產(chǎn)仔49只，其中死胎6只，無肛?zé)o尾畸形1只，后肢出現(xiàn)類馬蹄內(nèi)翻足畸形的共30只?；纬霈F(xiàn)率為61.2％。未出現(xiàn)畸形的實(shí)驗(yàn)組新生鼠足的外觀與對(duì)照組相同。(2)熒光RT-PCR結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組在HoxA9及 TBX-3 基因的平均拷貝數(shù)明顯低

4、于對(duì)照組和非畸形組(P<0.001，P<0.05)；而在CASP10基因的平均拷貝數(shù)則明顯大于對(duì)照組和非畸形組(P<0.001)。而對(duì)照組與非畸形組在各個(gè)基因的拷貝數(shù)比較上則無明顯差異(：P>0.05)。 [結(jié)論]：(1)維甲酸能成功誘導(dǎo)出SD大鼠新生幼鼠類馬蹄內(nèi)翻足畸形的模型。(2)維甲酸對(duì)于SD大鼠的 TBX-3，HoxA9，CASP10基因的表達(dá)均有影響。(3)維甲酸可能與通過影響 TBX-3，HoxA9，CASP10 基