乳腺癌新輔助化療療效與外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞變化的初步研究.pdf

1、乳腺癌是女性發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是導(dǎo)致乳腺癌患者死亡的首要因素。利用現(xiàn)代免疫學(xué)和分子分析技術(shù),能在血液中檢測(cè)到一種微轉(zhuǎn)移細(xì)胞,稱為循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulatingtumorcells,CTC)。CTC是乳腺癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。研究表明,在乳腺癌早期即有CTC進(jìn)入血液并發(fā)生全身播散。檢測(cè)CTC并探討其意義已經(jīng)成為當(dāng)前臨床研究熱點(diǎn)。既往研究顯示,在乳腺癌患者化療期間,實(shí)時(shí)檢測(cè)外周血CTC水平及變化趨勢(shì)有助于評(píng)

2、估和預(yù)測(cè)輔助治療的效果。但目前有關(guān)CTC化療療效的研究主要集中在Ⅰ~Ⅲ乳腺癌術(shù)后化療和Ⅳ期乳腺癌患者的綜合治療上,而對(duì)于CTC與新輔助化療(NeoadjuvantChemotherapy,NCT)療效關(guān)系研究較少且存在爭(zhēng)議。另外,不是所有的乳腺癌腫瘤細(xì)胞在脫離原發(fā)腫瘤進(jìn)入血循環(huán)系統(tǒng)中都能存活,存活下來(lái)的腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性變化是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一,本課題擬對(duì)上述問(wèn)題進(jìn)行初步探討。
　　實(shí)驗(yàn)方法和主要結(jié)果
　　1、乳腺癌外周血

3、循環(huán)腫瘤細(xì)胞變化情況與新輔助化療療效關(guān)系的初步研究
　　方法:抽取70例乳腺癌患者NCT前后健側(cè)上肢靜脈血5ml,利用密度梯度離心法富集血標(biāo)本中單個(gè)核細(xì)胞,通過(guò)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)所獲得單個(gè)核細(xì)胞中細(xì)胞角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)陽(yáng)性的CTC數(shù)目。分析NCT前后CTC表達(dá)陽(yáng)性變化情況與影像學(xué)RECIST和病理學(xué)Miller-Payne標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估NCT療效的關(guān)系
　　結(jié)果：
　　在70例

4、乳腺癌患者中NCT前外周血CTC檢出率為24.29％(17/70),與患者年齡(P=0.008)及HER-2(P=0.029)表達(dá)情況有關(guān),NCT后外周血CTC檢出率為10.00%(7/70)。根據(jù)NCT前后CTC檢測(cè)情況,將患者分為陽(yáng)性-陽(yáng)性、陽(yáng)性-陰性、陰性-陽(yáng)性及陰性-陰性等四組,以RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估NCT時(shí),四組有效率分別66.67%(2/3)、78.57%(11/14)、0(0/4)和71.43%(35/49),差異具有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義(P=0.023);以Miller-Payne標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估NCT療效時(shí),四組有效率分別為66.67%(2/3)、71.43%(10/14)、0(0/4)和69.39%(34/49),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.043)。
　　2、乳腺癌MCF-7細(xì)胞系抗失巢凋亡特性的初步研究
　　方法:利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)正常培養(yǎng)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞和低粘附培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)24h、48h、72h、120h、168h后MCF-7細(xì)胞的凋亡率。

6、利用CCK-8法和transwell小室檢測(cè)具備抗失巢凋亡能力的MCF-7細(xì)胞的增殖、遷移能力,并對(duì)比抗失巢凋亡MCF-7細(xì)胞與正常培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞克隆形成能力。利用流式細(xì)胞分選抗失巢凋亡MCF-7細(xì)胞和正常MCF-7細(xì)胞中兩群細(xì)胞CD44+/CD24-/low比例檢測(cè)
　　結(jié)果：
　　通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞經(jīng)過(guò)低粘附環(huán)境培養(yǎng)后,24h凋亡率為12.35%,48h為31.6%,72h為40.7%,12

7、0h為44.0%,1w為48.9%。具備抗失巢凋亡能力的MCF-7細(xì)胞的遷移能力(實(shí)驗(yàn)組VS對(duì)照組:275±13VS55±16)、增殖能力(96hOD值實(shí)驗(yàn)組VS對(duì)照組:3.09±0.27VS2.31±0.18))及克隆形成能力(實(shí)驗(yàn)組VS對(duì)照組:32±3VS3±1)均顯著強(qiáng)與普通MCF-7細(xì)胞(P<0.05),并且抗失巢凋亡MCF-7細(xì)胞能夠富集較多的乳腺癌腫瘤干細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組VS對(duì)照組:80.93±1.19%VS2.85±1.86%)