CtIP在肝癌細(xì)胞中的細(xì)胞周期性表達(dá)及其泛素化初步研究.pdf

1、目的
　　觀察CtIP在細(xì)胞周期不同時(shí)相的表達(dá)水平,探討CtIP在組織水平與細(xì)胞水平表達(dá)差異的原因;觀察SIAH1對(duì)CtIP的影響,初步探討CtIP泛素化機(jī)制及對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響。
　　方法
　　1、應(yīng)用胸腺嘧啶核苷(TdR)誘導(dǎo)細(xì)胞同步化,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測同步化效果并篩選獲得目標(biāo)時(shí)相的最佳作用時(shí)間。
　　2、應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測人肝癌細(xì)胞系HepG2與人正常肝細(xì)胞系L

2、02未同步化及同步化不同時(shí)相中CtIP與SIAH1的表達(dá)水平。
　　3、應(yīng)用RNA干擾(RNAinterference,RNAi)技術(shù),誘導(dǎo)泛素化酶SIAH1基因沉默,應(yīng)用qRT-PCR與蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Westernblotting)檢測SIAH1的基因干擾效率并篩選合適的siRNA(smallinterferingRNA)序列、濃度與作用時(shí)間。
　　4、應(yīng)用qRT-PCR與蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測人肝癌細(xì)胞系HepG2中S

3、IAH1基因沉默后CtIP的mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　5、應(yīng)用WST-1細(xì)胞增殖檢測試劑、AnnexinV-FITC雙染方法和流式細(xì)胞術(shù)檢測SIAH1基因沉默后人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖、凋亡及細(xì)胞周期變化。
　　結(jié)果
　　1、在細(xì)胞周期的G1期,CtIP在人肝癌細(xì)胞系HepG2中的表達(dá)低于人正常肝細(xì)胞系L02,P值<0.05,在(S+G2)期,CtIP的表達(dá)趨勢相反,P值<0.05,差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4、　　2、CtIP與SIAH1在肝癌細(xì)胞系HepG2的細(xì)胞周期進(jìn)程中,G1期表達(dá)水平較低,越過G1/S交界后明顯升高,在2h處達(dá)到峰值,隨后迅速下降。
　　3、SIAH1基因干擾后,人肝癌細(xì)胞系HepG2中CtIP的mRNA水平表達(dá)升高,P值<0.05,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CtIP蛋白質(zhì)水平未檢測到明顯變化。
　　4、SIAH1基因沉默后,人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖水平降低,P值<0.05,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論