慢粒間充質(zhì)干細(xì)胞在伊馬替尼耐藥中的作用研究.pdf

1、背景:伊馬替尼治療無效的慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myeloidleukemia，CML)已被歸因于靜默白血病干細(xì)胞對(duì)伊馬替尼無效。通過保護(hù)惡性祖細(xì)胞增殖和自我更新的功能，CML的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可能參與了保護(hù)白血病細(xì)胞的持續(xù)增殖及進(jìn)展轉(zhuǎn)變。
　　方法:從CML病人獲取骨髓，以密度梯度離心法結(jié)合貼壁分離篩選法提取間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSC);從CML慢性期病人取骨髓，在Ficoll淋

2、巴細(xì)胞分離液中離心獲得慢粒單個(gè)核細(xì)胞;用免疫磁珠法分離CD34+慢粒祖細(xì)胞;以流式細(xì)胞術(shù)對(duì)上述細(xì)胞進(jìn)行特性鑒定。分為CML細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)及CML細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)兩組，分別加入1μM或5μM伊馬替尼，用碘化丙啶染色錨定蛋白Ⅴ雙重染色定量（PI-AnexinⅤ）測(cè)定伊馬替尼誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率。同時(shí)用Western-blot檢測(cè)Bcl-XL蛋白表達(dá)水平。用定量遷移實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)MSC對(duì)原代CML細(xì)胞的趨化功能。
　　結(jié)果:
　　1.

3、成功分離出MSC及原代慢粒細(xì)胞，所獲取MSC純度＞95％;CD34+細(xì)胞純度＞95％。
　　2.伊馬替尼誘導(dǎo)原代CML細(xì)胞凋亡具有劑量依賴性，與間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)，CML細(xì)胞凋亡率減少。
　　3.與間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)，在伊馬替尼濃度為1μM時(shí)，CD34+慢粒細(xì)胞凋亡率從41.4±3.2降至25.7±4.8％，CML原代細(xì)胞凋亡率從45.7±14.8降低到了15.2±5.9％;在伊馬替尼濃度為5μM時(shí)，CD34+CML細(xì)胞凋亡

4、率從77.1±6.9降至55.4±5.4％，CML原代細(xì)胞凋亡率從58.2±12.1降低到25.3±4.8％。
　　4.Western-blot測(cè)定表明，與MSC共培養(yǎng)CML細(xì)胞中Bcl-XL的表達(dá)水平在1μM伊馬替尼處理后顯著增加，從1.8±0.3％增加至15.9±2.7％。
　　5.MSC上清液對(duì)原代CML細(xì)胞具有化學(xué)誘導(dǎo)活性，11.0±3.5％的原代慢粒細(xì)胞移向未稀釋的上清液，遷移也是濃度依賴性的。
　　結(jié)論:C