去氨加壓素和垂體后葉素對肝星狀細胞增殖、收縮及分泌的影響研究.pdf

1、目的：
　　 醋酸去氨加壓素和垂體后葉素是目前臨床上治療肝硬化食管胃底靜脈曲張出血的常規(guī)用藥,通過直接或間接地引起內(nèi)臟血管收縮減少門靜脈血流量以降低門靜脈壓力,減少側(cè)支血流,從而治療門脈高壓導(dǎo)致的食管胃靜脈曲張破裂出血。然而,醋酸去氨加壓素和垂體后葉素在肝硬化患者使用過程中是否也同時作用于肝星狀細胞,引起肝星狀細胞功能和形態(tài)的改變,從而對肝竇血管阻力產(chǎn)生影響,目前尚不得而知。而肝星狀細胞形態(tài)和功能的變化對調(diào)整肝竇血管阻力和門靜脈

2、壓具有重要作用,因此研究醋酸去氨加壓素和垂體后葉素對肝星狀細胞功能和形態(tài)影響,對深入探討該類藥物影響門靜脈高壓的分子機制具有指導(dǎo)意義。
　　 基于以上問題,本實驗對比研究醋酸去氨加壓素和垂體后葉素對肝星狀細胞增殖、收縮及分泌功能的影響,進而探討該兩種藥物對肝星狀細胞形態(tài)和功能方面的影響。
　　 方法：
　　 本研究以人肝星狀細胞LX-2(HSC LX-2)為研究對象,設(shè)置空白對照組,醋酸去氨加壓素藥物組和垂體后葉

3、素藥物組。其中每種藥物又分別設(shè)置低濃度(等同于臨床常規(guī)用藥的體內(nèi)血清藥物濃度)、中濃度(等同于常規(guī)用藥血清藥物濃度的10倍)、高濃度(等同于常規(guī)用藥血清藥物濃度的100倍)三個組。分別進行以下三個方面的研究:(1)采用wst-1(水溶性的四唑鹽)方法分別檢測以上各組于450hm處光密度值,觀察不同組別的HSC增殖狀況;(2)通過顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和拍照后方格紙計算膠原凝膠板面積比法,研究這兩種藥物對HSC收縮功能的影響;(3)采用EL

4、SA方法檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的濃度,探討醋酸去氨加壓和垂體后葉素對HSC分泌功能的影響。
　　 結(jié)果：
　　 (1)空白對照組、醋酸去氨加壓素低濃度組(1×10-10mol/L組)及中濃度組(1×10-9mol/L組)的OD450分別為0.458±0.015、0.459±0.017和0.467±0.024,兩兩比較P＞0.05,無統(tǒng)計學(xué)差

5、異,而高濃度醋酸去氨加壓素組(1×10-8mol/L組)為0.436±0.015,與空白對照比較P＜0.05,具有統(tǒng)計學(xué)差異;垂體后葉素濃度由低到高(0.1U/L組、1U/L組、1OU/L組)OD450值分別為:0.495±0.011,0.507±0.015和0.501±0.009,與空白對照組比較均為P＜0.05,具有統(tǒng)計學(xué)差異。(2)醋酸去氨加壓素各組膠原凝膠板面積比(77.07±4.42％、75.85±3.70％、72.74±3.

6、92％)與空白對照組(77.40±4.56％)比較均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);而垂體后葉素各組膠原凝膠板面積比較對照組均明顯減小(57.83±3.96％、50.28±6.69％、43.56±7.68％),有顯著性差異(P＜0.01)。這兩種藥物對應(yīng)濃度組比較,垂體后葉素引起的凝膠板面積縮小更明顯。(3)低濃度醋酸去氨加壓素組測得MMP-2濃度(13.321±0.098 ng/ml)較空白對照組(12.281±0.169 ng/m

7、l)升高,且P＜0.01,中濃度組(12.230±0.153 ng/ml)與空白對照組差別無統(tǒng)計學(xué)意義,高濃度組(12.061±0.126ng/ml)較空白對照組減低,P＜0.05;垂體后葉素各藥物濃度組(12.899±0.150 ng/ml、13.662±0.152 ng/ml、13.698±0.119 ng/ml)較空白對照組中MMP-2濃度比較均升高,均有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。醋酸去氨加壓素各組TGF-β1濃度(5.233±0.102

8、 pg/ml、17.749±0.188 Pg/ml、36.060±0.227 Pg/ml)較對照組(0.751±0.083 pg/ml)均升高,均P＜0.01,并呈現(xiàn)藥物濃度依賴關(guān)系;垂體后葉素各組TGF-β1濃度(15.615±0.099 pg/ml、38.460±0.209pg/ml、49.053±0.115 pg/ml)較對照組均明顯升高,均P＜0.01。兩種藥物對應(yīng)濃度組相比較,垂體后葉素刺激HSC產(chǎn)生的TGF-β1作用更強。醋

9、酸去氨加壓素組測得Ⅰ型膠原濃度(分別為7.024±0.122 ng/ml、7.027±0.087ng/ml、7.028±0.106 ng/ml)較對照組(7.012±0.391 ng/ml)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義;低濃度垂體后葉素組測得Ⅰ型膠原濃度(7.106±0.168 ng/ml)與對照組比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,而中濃度組和高濃度組Ⅰ型膠原濃度(7.207±0.160 ng/ml、7.212±0.281 ng/ml)升高較對照組具有顯著性差

10、異。醋酸去氨加壓素組測得Ⅲ型膠原濃度分別為7.397±0.128 ng/ml、7.739±0.282ng/ml、7.746±0.169 ng/ml,與對照組(7.395±0.290 ng/ml)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異;低濃度垂體后葉素組Ⅲ型膠原濃度(7.506±0.324 ng/ml)與對照組比較,無統(tǒng)計學(xué)差異,而中濃度組和高濃度組Ⅲ型膠原濃度(7.802±0.162ng/ml、7.823±0.195 ng/ml)升高較對照組具有顯著性差異

11、,P＜0.05。
　　 結(jié)論：
　　 上述結(jié)果表明:(1)垂體后葉素能明顯促進HSC增殖,而醋酸去氨加壓素對HSC增殖無明顯影響;(2)垂體后葉素能明顯引起HSC收縮及形態(tài)變化,而醋酸去氨加壓素對HSC收縮無明顯影響;(3)常規(guī)用藥劑量的垂體后葉素對HSC產(chǎn)生MMP-2有促進作用,但對膠原分泌無明顯影響,而藥濃度更高時對MMP-2及膠原分泌均有促進作用,醋酸去氨加壓素未見明顯的促進HSC產(chǎn)生MMP-2、膠原Ⅰ及Ⅲ的作用,