抗苗勒管激素(AMH)在三種多囊卵巢綜合征(PCOS)大鼠模型中的變化及相關(guān)性分析.pdf

1、多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)為育齡期女性常見內(nèi)分泌疾病，發(fā)病率6-10％，以持續(xù)性排卵障礙、高雄激素血癥、卵巢多囊化為特征?？姑缋展芗に?Anti-mullerian Hormone，AMH)，又稱苗勒管抑制素(Mullerian inhibiting substance，MIS)，是轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowth factor-β，TGF-β)超家族成員之一。A刪

2、在卵巢中由卵巢顆粒細(xì)胞分泌，在卵泡生長發(fā)育過程中具有抑制卵泡募集和FSH誘導(dǎo)的卵泡生長的作用。PCOS患者血清AMH較正常女性升高2-3倍，因臨床取材困難，因此尋找合適的動(dòng)物模型對(duì)于研究AMH在PCOS中的作用具有重要意義。目前國內(nèi)外存在的PCOS動(dòng)物模型多種多樣，造模所用動(dòng)物及造模方法各不相同，各種模型或在內(nèi)分泌方面，或在形態(tài)學(xué)方面與PCOS有相似之處，本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谔接慉MH在三種常用大鼠PCOS模型中的變化情況并分析AMH與其它指

3、標(biāo)之間的相關(guān)性，為后續(xù)研究AMH在PCOS發(fā)生發(fā)展中的作用提供動(dòng)物模型基礎(chǔ)。
　　第一部分:AMH在來曲唑大鼠PCOS模型中的變化及相關(guān)性分析
　　目的:采用來曲唑灌胃方法進(jìn)行造模，根據(jù)PCOS Rotterdam2003診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)模型進(jìn)行特點(diǎn)分析，并研究AMH在模型中的變化情況及與其它指標(biāo)的相關(guān)性。
　　方法:選取6周齡雌性SD大鼠，來曲唑灌胃造模，觀察大鼠陰道涂片觀察性周期變化，記錄大鼠體重變化，測

4、量大鼠雙側(cè)離體卵巢濕重及體積，利用ELISA法檢測大鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)、胰島素(INS)，AMH。對(duì)卵巢行石蠟切片行HE染色光鏡觀察其病理學(xué)改變，免疫組化及western blot檢測AMH及AMH-RII蛋白表達(dá)情況，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件統(tǒng)計(jì)分析模型特點(diǎn)。
　　結(jié)果:來曲唑模型組表現(xiàn)出明顯的雄激素、LH升高，孕酮降低以及卵巢多囊性改變，囊性擴(kuò)張卵泡數(shù)和總卵泡數(shù)明顯大于對(duì)照組。此

5、外，模型組大鼠體重、卵巢濕重及卵巢體積也明顯大于對(duì)照組。血清AMH及卵巢組織局部AMH、AMH-RII的表達(dá)均升高。血清抗苗勒管激素與雄激素、生長卵泡數(shù)呈正相關(guān)，與體重呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:來曲唑模型組采用成年大鼠造模，模型表現(xiàn)出明顯的體重增加，卵巢體積及濕重增加，并有胰島素抵抗表現(xiàn)，根據(jù)Rotterdam診斷標(biāo)準(zhǔn)為成功的PCOS模型。相關(guān)性分析顯示血清抗苗勒管激素的升高可能由于雄激素相關(guān)的生長卵泡增多引起。
　　第二部分:

6、AMH在炔諾酮＆hCG大鼠PCOS模型組中的變化及相關(guān)性分析
　　目的:采用18-甲基炔諾酮聯(lián)合hCG法對(duì)大鼠進(jìn)行造模，根據(jù)Rotterdam診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)模型進(jìn)行特點(diǎn)分析，并研究AMH在模型中的變化情況及與其它指標(biāo)的相關(guān)性。
　　方法:選取23日齡雌性SD大鼠，皮下埋植18-甲基炔諾酮避孕硅膠棒，皮下注射hCG。觀察大鼠陰道口開放日齡，大鼠陰道涂片觀察性周期變化，記錄大鼠體重變化、大鼠雙側(cè)離體卵巢濕重及體積，利

7、用ELISA法檢測大鼠血清中相關(guān)激素水平，對(duì)卵巢行石蠟切片行HE染色光鏡觀察其病理學(xué)改變，免疫組化及westernblot檢測AMH及AMH-RII蛋白表達(dá)情況，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件統(tǒng)計(jì)分析模型的特點(diǎn)。
　　結(jié)果:模型組較對(duì)照組相比雄激素明顯升高，卵巢多囊性改變明顯，卵巢濕重及卵巢體積明顯增大，但模型組大鼠體重較對(duì)照組無明顯增加。AMH及其受體在卵巢組織局部表達(dá)增高，未發(fā)現(xiàn)AMH與其它指標(biāo)之間明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論:炔諾酮&hCG

8、模型組采用幼齡大鼠造模，雄激素升高，卵巢多囊性改變明顯，符合Rotterdam2003診斷標(biāo)準(zhǔn)，為成功的PCOS大鼠模型。AMH在卵巢局部組織高表達(dá)機(jī)制有待進(jìn)一步研究
　　第三部分:AMH在硫酸普拉睪酮鈉＆hCG大鼠PCOS模型組中的變化及相關(guān)性分析
　　目的:采用硫酸普拉睪酮鈉聯(lián)合hCG法對(duì)大鼠進(jìn)行造模，根據(jù)Rotterdam診斷標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)模型，對(duì)模型進(jìn)行特點(diǎn)分析，并研究AMH在模型中的變化情況及與其它指標(biāo)的相關(guān)性。

9、　　方法:選取23日齡雌性SD大鼠，每天皮下注射硫酸普拉睪酮鈉和hCG，觀察大鼠陰道口開放日齡，大鼠陰道涂片觀察性周期變化，記錄大鼠體重變化，測量大鼠雙側(cè)離體卵巢濕重及體積，利用ELISA法檢測大鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、孕酮(P)、雌二醇(E2)、胰島素(INS)，觀察卵巢病理學(xué)改變，免疫組化及western blot檢測AMH及AMH-RII蛋白表達(dá)情況，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件統(tǒng)計(jì)分析模型特點(diǎn)。
　　結(jié)果:硫酸